海刀豆與蕨藻中活性物質(zhì)的分離純化及其性質(zhì)的研究.pdf

1、海刀豆與羽狀蕨藻是我國海洋資源中應(yīng)用較少的天然植物,據(jù)文獻報道海刀豆與蕨藻中都具有相應(yīng)的活性物質(zhì),只是還沒有完整的分離純化體系,將其真正應(yīng)用到工業(yè)生產(chǎn)中。本文主要研究了應(yīng)用高速逆流色譜從海刀豆及蕨藻中分離出活性物質(zhì),并對其抗氧化和抗腫瘤活性進行鑒定,從而為進一步實施海洋活性成分高通量篩選提供理論和實踐上的依據(jù),為新型抗氧化及抗腫瘤藥物的實踐應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　本研究以海南沿海灘涂的海刀豆為原料,經(jīng)過清洗干燥后由加速溶劑萃取提取

2、其中的活性物質(zhì),提取工藝條件經(jīng)過響應(yīng)面優(yōu)化為:萃取溫度130℃,萃取時間16 min,甲醇濃度為66％,循環(huán)次數(shù)2次,得到的理論提取率為84.81%,經(jīng)驗證實際提取率為83.43%;之后應(yīng)用高速逆流色譜對海刀豆粗提物實現(xiàn)分離純化,所用的HSCCC溶劑體系為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(2:5:2:5, V/V),先以下相為固定相,上相為流動相,正接反轉(zhuǎn)進行分離,轉(zhuǎn)速850 rpm/min,流速2.0 mL/min,收集有效餾分;將收集到的

3、有效餾分再以同樣的溶劑體系進行二次分離,不同的是以上相為固定相,下相為流動相,正接正轉(zhuǎn)進行分離,轉(zhuǎn)速流速與一次分離一致,收集餾分;由HPLC檢測分離樣品的純度,用峰面積歸一法得到接收液純度為99.48%;產(chǎn)品結(jié)構(gòu)由MS,1H-NMR,13C-NMR鑒定,結(jié)果顯示分離純品分子量為376.05,名字為(2R,3S,4R,5S)-2,3,4-三羥基-6-甲氧基-6-氧代-5-[(3,4,5-三羥基苯甲酰基)氧基]己酸,在海刀豆中含量為3.46

4、10 mg/g。經(jīng)實驗驗證,海刀豆分離純品對于·OH、O2-·、DPPH自由基的IC50分別為0.052、0.057、0.010 mg/mL,具有較強的抗氧化活性,甚至可與抗壞血酸媲美。
　　羽狀蕨藻經(jīng)過清洗干燥后由微波輔助萃取提取其中的活性物質(zhì)-蕨藻紅素,影響蕨藻紅素提取率的參數(shù)條件經(jīng)過正交試驗進行優(yōu)化,最終確定微波提取最佳工藝條件為:微波功率300 W,提取溶劑90%乙醇,微波溫度50℃,微波時間15 min,料液比1:40

5、g/mL,按此工藝條件進行重復(fù)性驗證試驗得到蕨藻紅素的平均提取率為92.93%,RSD為0.50%。蕨藻紅素的分離純化是通過高速逆流色譜實現(xiàn)的,所用的HSCCC溶劑體系為正己烷-甲醇-水(2:1:1, V/V),先以上相為固定相,下相為流動相,正接正轉(zhuǎn)進行分離,根據(jù)在線圖譜收集有效餾分;將收集到的目標物餾分濃縮后由蛋白質(zhì)純化儀進一步純化,得到純度較高的蕨藻紅素;由HPLC測得分離純品的純度為99.37%;由MS,1H-NMR,13C-N