“甘飛保肝注射液”的制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及對(duì)小鼠保肝作用研究.pdf

1、肝臟是各種營養(yǎng)物質(zhì)代謝和解毒中心，肝損傷是以各型肝炎病毒導(dǎo)致最為常見，其次是酒精性肝病，某些化學(xué)品也有較強(qiáng)的引起肝損傷的作用。鎘可通過呼吸道、消化道進(jìn)入機(jī)體，造成嚴(yán)重的肝損傷。保護(hù)肝臟的藥物很多，而中藥及其提取物的應(yīng)用也越來越廣泛，代表物有甘草酸二銨和水飛薊賓，主要功能是從清除活性氧、對(duì)抗脂質(zhì)過氧化，維持細(xì)胞膜的流動(dòng)性、保護(hù)肝細(xì)胞膜、促進(jìn)肝細(xì)胞修復(fù)、再生，從而起抗肝纖維化作用。研究表明，將其制備成磷脂復(fù)合物可有效提高其體內(nèi)吸收，顯著地改

2、善生物有效性。
　　本研究擬制備出甘草酸二銨和水飛薊賓的混合磷脂復(fù)合物并進(jìn)行表征測(cè)試，將磷脂復(fù)合物制備成注射液并建立相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，最后觀察注射液對(duì)小鼠的肝臟保護(hù)作用。
　　實(shí)驗(yàn)選取大豆磷脂作輔料，丙酮作溶劑制備出甘草酸二銨和水飛薊賓的復(fù)方磷脂復(fù)合物。采取差示掃描量熱法(DSC)、紫外分光光度法(UV)、紅外光譜分析(IR)、透射電鏡(TEM)、激光粒度分析儀對(duì)磷脂復(fù)合物進(jìn)行表征測(cè)試，并將復(fù)合物制備成注射液。DSC圖顯示，復(fù)合

3、物的相變溫度稍降低，物理混合物的相變溫度則出現(xiàn)重疊，但相變溫度的范圍并無明顯改變;UV圖顯示大豆磷脂在200～400 nm波長區(qū)無吸收峰，水飛薊賓、甘草酸二銨、物理混合物、磷脂復(fù)合物的紫外圖譜形狀類似，吸收峰均在240nm處;IR顯示物理混合物與磷脂復(fù)合物特征峰出現(xiàn)差異證明了復(fù)合物并不是磷脂與水飛薊賓和甘草酸二銨簡(jiǎn)單的物理混合;TEM圖顯示磷脂復(fù)合物為形狀規(guī)整的囊泡;粒徑結(jié)果表明所制備的磷脂復(fù)合物粒徑在100～120nm較多，平均粒徑達(dá)

4、到113.6nm，從60nm～160nm范圍呈正態(tài)分布。
　　對(duì)所制備的注射液進(jìn)行顏色、pH、澄明度、無菌等項(xiàng)目檢查，采用高效液相色譜(HPLC)對(duì)注射液的有效成分的含量進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)注射液的穩(wěn)定性進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果顯示，所制備注射液顏色呈棕黃色，pH為6.52±0.15(RSD=0.96，n=5)，注射液經(jīng)澄明度測(cè)定儀和無菌檢查均合格;HPLC圖可見甘草酸二銨對(duì)照品保留時(shí)間10.2min左右，水飛薊賓的保留時(shí)間20.1 min

5、左右，而磷脂在這兩個(gè)位置無峰出現(xiàn)，并且基線平穩(wěn);甘草酸二銨標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=54894.62X-75.33，r=0.99995(n=5)，水飛薊賓的線性回歸方程為Y=820326.52X-98626.53 r=0.99992(n=5);精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，甘草酸二銨對(duì)照品峰面積積分值RSD為0.86％，水飛薊賓對(duì)照品峰面積積分值RSD為1.12％，重現(xiàn)性結(jié)果顯示，注射液的甘草酸二銨和水飛薊賓RSD分別為0.94％和0.89％，回收率

6、實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，甘草酸二銨和水飛薊賓的回收率分別達(dá)到96.42％和97.35％，RSD分別為1.05％和0.92％;含量測(cè)定結(jié)果顯示，三批次注射液甘草酸二銨含量分別達(dá)到96.54％、96.21％和97.05％，而水飛薊賓分別達(dá)到97.06％、97.25％和96.87;穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在高溫和強(qiáng)光照射后可見異物沒有發(fā)生顯著變化。放置6個(gè)月后，磷脂復(fù)合物水針劑未發(fā)生明顯變化。
　　實(shí)驗(yàn)選取昆明種小鼠120只，雌雄各半。隨機(jī)分6組，組

7、Ⅰ甘草酸二銨，組Ⅱ水飛薊賓，組Ⅲ甘草酸二銨和水飛薊賓物理混合物，組Ⅳ“甘飛保肝注射液”，組Ⅴ為陰性對(duì)照，組Ⅵ為造模不治療組。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組腹腔注射，按40mg/kg體重給藥，連續(xù)給藥5d，1次/d。Ⅴ、Ⅵ組同法注射生理鹽水，于末次給藥后1h，除陰性對(duì)照組腹腔注射等體積的生理鹽水外，其余5組均予以3.5mg/kg腹腔注射CdCl2溶液。染鎘24h后，將所有小鼠處死，摘取小鼠肝臟，制備肝組織勻漿，離心取上清液進(jìn)行GSH-Px、SOD、CA

8、T、MDA含量測(cè)定，實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用SPSS17.0進(jìn)行差異性分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。結(jié)果顯示單純?nèi)炬k組，組織內(nèi)SOD、GSH-Px及CAT活性較陰性對(duì)照組下降，MDA升高。水飛薊賓、甘草酸二銨、物理混合物和“甘飛保肝注射液”均可增加染鎘小鼠的肝組織中SOD、GSH-Px及CAT的活性，并抑制其MDA的生成。
　　以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明:DSC、UV、IR證明了磷脂復(fù)合物的形成，磷脂和藥物之間不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，磷脂復(fù)合物并不是磷脂與水飛薊