慢性間歇性低壓低氧對(duì)腎血管性高血壓大鼠的降壓作用及其血管機(jī)制.pdf

1、本研究旨在應(yīng)用腎血管性高血壓大鼠，以大鼠腸系膜動(dòng)脈上BKCa通道為研究靶點(diǎn)，通過(guò)微血管張力測(cè)定、western-blot和全細(xì)胞膜片鉗等方法從整體、組織和細(xì)胞分子水平探討CIHH抗腎血管性高血壓的血管源性機(jī)制。
　　本研究分為三部分:
　　第一部分 慢性間歇性低壓低氧對(duì)腎血管性高大鼠腸系膜動(dòng)脈舒縮活動(dòng)的影響
　　目的:明確CIHH對(duì)腎血管性高血壓大鼠的降壓作用以及CIHH對(duì)高血壓大鼠腸系膜動(dòng)脈收縮和舒張的影響。

2、　　方法:大鼠隨機(jī)分為四組:假手術(shù)組(SHAM)、間歇性低壓低氧處理組(CIHH)、腎血管性高血壓組(RVH)、腎血管性高血壓+間歇性低壓低氧處理組(RVH+CIHH)。CIHH組大鼠置于低壓氧艙中，接受相當(dāng)于海拔5000m高度、28天、每天6小時(shí)的低壓低氧處理，其余時(shí)間置于常氧環(huán)境。RVH組大鼠通過(guò)兩腎一夾方法，利用Ω形銀夾縮窄一側(cè)腎動(dòng)脈，造成腎血管性高血壓。SHAM組大鼠只接受手術(shù)，而不縮窄腎動(dòng)脈。RVH+CIHH組大鼠在產(chǎn)生腎血管

3、性高血壓后接受28天CIHH處理。每周定時(shí)測(cè)量各組動(dòng)物的體重和血壓。利用微血管環(huán)張力測(cè)定法分別觀察PE和AngⅡ誘導(dǎo)的動(dòng)脈環(huán)收縮、ACh誘導(dǎo)的動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張和SNP誘導(dǎo)的非內(nèi)皮依賴性舒張。
　　結(jié)果:1.CIHH處理對(duì)正常大鼠基礎(chǔ)血壓和體重?zé)o影響(P＞0.05)，但可顯著對(duì)抗RVH大鼠血壓的升高和體重的降低(P＜0.05)。
　　2.與SHAM大鼠相比較，RVH大鼠腸系膜動(dòng)脈環(huán)對(duì)AngⅡ和PE反應(yīng)性提高、收縮增強(qiáng)(P＜0

4、.05);CIHH大鼠腸系膜動(dòng)脈環(huán)對(duì)AngⅡ、PE收縮反應(yīng)性降低、收縮減弱(P＜0.05)，并可對(duì)抗RVH大鼠動(dòng)脈環(huán)收縮的增強(qiáng)(P＜0.05)。
　　3.RVH大鼠腸系膜動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)降低（P＜0.05），CIHH處理可增加腸系膜動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)（P＜0.05），并對(duì)抗RVH大鼠腸系膜動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張的降低(P＜0.05)。
　　4.與SHAM大鼠相比，L-NAⅧ對(duì)RVH大鼠內(nèi)皮依賴性舒張的阻斷效應(yīng)顯著降低（

5、P＜0.05），對(duì)CIHH大鼠內(nèi)皮依賴性舒張的阻斷效應(yīng)顯著增強(qiáng)(P＜0.05)，并可對(duì)抗RVH大鼠對(duì)L-NAME阻斷效應(yīng)的降低(P＜0.05)。
　　5.RVH大鼠腸系膜動(dòng)脈非內(nèi)皮依賴性舒張明顯降低（P＜0.05），CIHH處理可增加大鼠腸系膜動(dòng)脈非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)(P＜0.05)，對(duì)可抗RVH大鼠腸系膜動(dòng)脈非內(nèi)皮依賴性舒張降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.CIHH處理對(duì)腎血管性高血壓大鼠具有明顯的降壓作用。
　

6、　2.CIHH的抗腎血管性高血壓的作用可能通過(guò)降低腸系膜動(dòng)脈收縮、增強(qiáng)內(nèi)皮依賴性和非內(nèi)皮依賴性舒張所實(shí)現(xiàn)。
　　第二部分 BKCa通道參與CIHH調(diào)控腸系膜動(dòng)脈舒縮活動(dòng)
　　目的:探討B(tài)KCa通道在CIHH對(duì)大鼠腸系膜動(dòng)脈舒縮活動(dòng)調(diào)控中的作用及其機(jī)制。
　　方法:大鼠隨機(jī)分為四組，CIHH組大鼠置于低壓氧倉(cāng)中，接受相當(dāng)于海拔5000m高度、28天、每天6小時(shí)的低壓低氧處理，其余時(shí)間置于常氧環(huán)境。RVH組大鼠通過(guò)兩腎一夾

7、方法，利用Ω形銀夾縮窄一側(cè)腎動(dòng)脈，造成腎血管性高血壓。SHAM組大鼠只接受手術(shù)，而不縮窄腎動(dòng)脈。RVH+CIHH組大鼠在產(chǎn)生腎血管性高血壓后接受CIHH處理。每周定時(shí)測(cè)量各組動(dòng)物的體重和血壓。利用微血管環(huán)張力測(cè)定法分別觀察BKCa通道開放劑和阻斷劑對(duì)大鼠腸系膜動(dòng)脈收縮和舒張的影響;采用急性酶解法分離大鼠腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(VSMC)。利用穿孔全細(xì)胞膜片鉗觀察BKCa通道的宏觀電流，利用western-blot方法檢測(cè)BKCa通道蛋白表

8、達(dá)變化。
　　結(jié)果:1.BKCa通道開放劑NS1619可顯著抑制各組動(dòng)脈環(huán)由PE誘發(fā)的收縮，而CIHH動(dòng)脈環(huán)的抑制程度顯著增加(P＜0.05)，并可對(duì)抗RVH動(dòng)脈環(huán)抑制程度的降低(P＜0.05)。
　　2.BKCa通道阻斷劑IBTX可顯著增強(qiáng)各組由PE誘發(fā)的收縮，而CIHH動(dòng)脈環(huán)的抑制程度顯著增強(qiáng)（P＜0.05），并可對(duì)抗RVH大鼠收縮抑制程度的降低(P＜0.05)。
　　3.BKCa通道開放劑NS1619可濃度依賴性

9、地誘發(fā)各組動(dòng)脈環(huán)舒張，而CIHH動(dòng)脈環(huán)對(duì)NS1619反應(yīng)性明顯增加（P＜0.05），并可對(duì)抗RVH大鼠動(dòng)脈環(huán)對(duì)NS1619反應(yīng)性的降低(P＜0.05)。
　　4.BKCa通道阻斷劑IBTX可顯著抑制各組動(dòng)脈環(huán)由ACh誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性舒張，而CIHH動(dòng)脈環(huán)的抑制程度顯著增加(P＜0.05)，并可對(duì)抗RVH動(dòng)脈環(huán)抑制程度的降低(P＜0.05)。
　　5.與SHAM組相比較，RVH動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa通道電流明顯下降(P＜0.0

10、5)，CIHH動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa通道電流明顯增加(P＜0.05)，并可對(duì)抗RVH動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa通道電流的降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.RVH大鼠腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa通道電流明顯下降，通道功能降低;CIHH大鼠腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa通道電流明顯增加、通道功能增強(qiáng)。
　　2.CIHH可通過(guò)開放大鼠腸系膜動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞BKCa通道，導(dǎo)致動(dòng)脈環(huán)收縮減弱和舒張?jiān)鰪?qiáng)。
　　3.RVH大鼠腸系膜

11、動(dòng)脈BKCa通道β1亞基表達(dá)下調(diào)、通道功能降低，導(dǎo)致腸系膜動(dòng)脈收縮反應(yīng)增強(qiáng)、舒張反應(yīng)降低。CIHH通過(guò)上調(diào)BKCa通道β1亞基，增強(qiáng)BKCa通道功能、對(duì)抗RVH大鼠腸系膜動(dòng)脈收縮增強(qiáng)和舒張減弱，維持血管正常舒縮反應(yīng)。
　　第三部分 CIHH調(diào)控BKCa通道的NO-cGMP-PKG信號(hào)通路
　　目的:探討NO-cGMP-PKG信號(hào)通路在CIHH調(diào)控BKCa通道中的作用和機(jī)制。
　　方法:大鼠隨機(jī)分為四組，CIHH組大鼠置

12、于低壓氧倉(cāng)中，接受相當(dāng)于海拔5000m高度、28天、每天6小時(shí)的低壓低氧處理，其余時(shí)間置于常氧環(huán)境。RVH組大鼠通過(guò)兩腎一夾方法，利用Ω形銀夾縮窄一側(cè)腎動(dòng)脈，造成腎血管性高血壓。SHAM組大鼠只接受手術(shù)，而不縮窄腎動(dòng)脈。RVH+CIHH組大鼠在產(chǎn)生腎血管性高血壓后接受28天CIHH處理。每周定時(shí)測(cè)量各組動(dòng)物的體重和血壓。通過(guò)急性酶解法獲得大鼠腸系膜動(dòng)脈VSMCs。利用穿孔全細(xì)胞膜片鉗方法記錄NO-cGMP-PKG信號(hào)分子對(duì)VSMCs上B

13、KCa通道電流的影響。通過(guò)western-blot方法檢測(cè)腸系膜動(dòng)脈eNOS蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果:1.NO前體L-arg顯著增加大鼠腸系膜動(dòng)脈VSMCs上BKCa電流;與SHAM細(xì)胞相比較，RVH細(xì)胞BKCa通道增加程度顯著降低(P＜0.05)，CIHH細(xì)胞BKCa通道電流增加程度顯著提高（P＜0.05），并可對(duì)抗RVH細(xì)胞BKCa通道電流增加程度的降低(P＜0.05)。
　　2.NOS拮抗劑L-NAME顯著抑制大鼠腸系

14、膜動(dòng)脈VSMC上BKCa電流;與SHAM細(xì)胞相比較，RVH細(xì)胞BKCa通道電流抑制程度顯著降低(P＜0.05)，CIHH細(xì)胞BKCa通道電流抑制程度顯著提高（P＜0.05），并可對(duì)抗RVH細(xì)胞BKCa通道電流抑制程度的降低(P＜0.05)。
　　3.NO供體SNP顯著增加大鼠腸系膜動(dòng)脈VSMC上BKCa電流;與SHAM細(xì)胞相比較，RVH細(xì)胞BKCa通道電流增加程度顯著降低(P＜0.05)，CIHH細(xì)胞BKCa通道增加程度顯著提高(

15、P＜0.05)，并可對(duì)抗RVH細(xì)胞BKCa通道電流增加程度的降低（P＜0.05）。
　　4.NO清除劑PTIO顯著抑制大鼠腸系膜動(dòng)脈VSMC上BKCa電流;與SHAM細(xì)胞相比較，RVH細(xì)胞BKCa通道電流抑制程度顯著降低(P＜0.05)，CIHH細(xì)胞BKCa通道電流抑制程度顯著提高(P＜0.05)，并可對(duì)抗RVH細(xì)胞BKCa通道電流抑制程度的降低(P＜0.05)。
　　5.PKG激動(dòng)劑8-BrcGMP顯著增加大鼠腸系膜動(dòng)脈V

16、SMC上BKCa電流;與SHAM細(xì)胞相比較，RVH細(xì)胞BKCa通道電流增加程度顯著降低(P＜0.05)，CIHH細(xì)胞BKCa通道電流增加程度顯著提高(P＜0.05)，可對(duì)抗RVH細(xì)胞BKCa通道電流增加程度的降低(P＜0.05)。
　　6.PKG阻斷劑KT5823顯著抑制大鼠腸系膜動(dòng)脈VSMC上BKCa電流;與SHAM細(xì)胞相比較，RVH細(xì)胞BKCa通道電流抑制程度顯著降低(P＜0.05)，CIHH細(xì)胞BKCa通道電流抑制程度顯著提

17、高(P＜0.05)，并可對(duì)抗RVH細(xì)胞BKCa通道電流抑制程度的降低(P＜0.05)。
　　7.與SHAM大鼠相比較，RVH大鼠腸系膜動(dòng)脈eNOS表達(dá)明顯降低(P＜0.05)，CIHH大鼠腸系膜動(dòng)脈eNOS表達(dá)明顯增加(P＜0.05)，并可對(duì)抗RVH大鼠腸系膜動(dòng)脈eNOS表達(dá)的降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.CIHH處理可促進(jìn)內(nèi)源性和外源性NO對(duì)動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BKCa通道功能的增強(qiáng)效應(yīng)，對(duì)抗RVH大鼠NO對(duì)BKCa通道