I型單純皰疹病毒去泛素化酶UL36USP逃逸DNA受體識別信號通路的分子機制.pdf

1、天然免疫信號通路通過模式識別受體識別病原相關分子模式抵抗病原微生物入侵。當DNA病毒入侵時，DNA識別受體識別病毒雙鏈DNA并介導天然免疫反應，其中NF-κB信號通路發(fā)揮重要作用。泛素化是一種廣泛存在的蛋白質翻譯后修飾，參與很多重要生命過程，如信號傳導、蛋白質降解及免疫應答反應等。多種病毒編碼的去泛素化酶（deubiquitinase，DUB）可通過調(diào)控宿主蛋白的泛素化來干擾宿主抗病毒應答。人類I型單純皰疹病毒（herpes simpl

2、ex virus type1，HSV-1）是一種線性雙鏈DNA病毒，在人群中極為常見，可導致口唇皰疹、角膜結膜炎、腦炎等疾病。HSV-1編碼皮層蛋白UL36，其蛋白氨基端的去泛素化酶結構域，稱為UL36USP，目前UL36USP干擾宿主抗病毒天然免疫信號通路的機制尚不清楚。
　　本文通過雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)結合多種分子生物學、免疫學實驗技術及利用細菌人工染色體技術構建的突變病毒，研究HSV-1 UL36USP干擾宿主DNA受

3、體信號通路的分子機制，以闡明 UL36USP在 HSV-1致病機制中的作用，為防治皰疹病毒尋找新的藥物靶點及研發(fā)新型藥物和疫苗奠定理論基礎。細胞質DNA受體cGAS（cyclic GMP-AMP synthase）識別外源DNA，利用STING（stimulator of interferon gene）介導的下游信號通路能顯著抑制HSV-1的復制。本研究發(fā)現(xiàn)，外源表達的UL36USP可以抑制ISD（interferon stimula

4、tory DNA）激活的干擾素β（interferon-β，IFN-β）的轉錄。雙熒光素酶報告基因實驗顯示，UL36USP可以抑制cGAS和STING激活的IFN-β和NF-κB的啟動子活性。同時，UL36USP可以抑制超表達STING、TBK1（TANK-binding kinase1）、IKKα（IκB kinaseα）、IKKβ激活的 NF-κB啟動子活性，但不能抑制 p65激活的 NF-κB啟動子活性，這說明UL36USP對NF

5、-κB通路的抑制水平在IKK和p65之間。進一步研究發(fā)現(xiàn)，UL36USP可以去泛素化IκBα抑制IκBα降解，從而抑制NF-κB激活。接下來我們用缺失了去泛素化酶活性的重組病毒（C40A HSV-1）來驗證UL36USP的作用，發(fā)現(xiàn)C40A HSV-1不能去泛素化IκBα，且感染C40A HSV-1的細胞，其IFN-β產(chǎn)生量明顯高于野生型（WT）HSV-1。這些結果表明，在DNA受體信號通路中，UL36USP利用其去泛素化酶結構域，通過