龍眼多糖的流變性、結(jié)構(gòu)鑒定及其清除自由基活性研究.pdf

1、龍眼（Dimocarpus longan lour.）屬于無患子科（Sapindaceae）龍眼屬(DinocarpusLour.)植物，原產(chǎn)于中國，同荔枝、香蕉、菠蘿同為華南四大珍果。古書中曾記載益智寧心，養(yǎng)血安神，長智斂汗，開胃益脾，潤肺止咳等，還能治產(chǎn)后浮腫，氣虛水腫，脾虛泄瀉，被視為藥食兩用的珍寶。但是龍眼不耐貯存，易變干、褐變或因滋生微生物而導(dǎo)致果實腐爛，導(dǎo)致貨架期變短。且龍眼以鮮食為主，用于加工制成產(chǎn)品的龍眼占總量比例不到3

2、0％。加之產(chǎn)量的大幅增加與貯藏、運輸和市場方面的制約，龍眼產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)效益的提升受到制約。有必要從加強(qiáng)龍眼有效活性成分的研究，探索其活性成分與結(jié)構(gòu)的關(guān)系，其生理或藥理機(jī)理等方面著手以提高龍眼龍眼生物利用度，從而實現(xiàn)一條開發(fā)龍眼藥用與保健深加工產(chǎn)品的科學(xué)道路。
　　 近年來，對龍眼功能性因子的研究越來越受到人們的關(guān)注，其中，龍眼多糖是龍眼中的一種生理活性物質(zhì)，有抗氧化活性，免疫調(diào)控和改善記憶力的作用，以及抗腫瘤、抑制酪氨酸酶活性和糖基

3、化反應(yīng)等生理功能。因此，龍眼多糖成為人們研究龍眼功能性因子的焦點之一。本課題以龍眼果肉為實驗材料，綜合應(yīng)用食品科學(xué)、天然產(chǎn)物化學(xué)、食品化學(xué)等現(xiàn)代研究方法學(xué)理論和分析化學(xué)、儀器分析等現(xiàn)代研究技術(shù)手段，分離純化了龍眼多糖，并對該多糖的分子量、結(jié)構(gòu)、流變特性以及清除自由基活性等進(jìn)行研究。主要研究內(nèi)容和結(jié)論概括如下:
　　 1、研究了龍眼多糖含量的測定方法，通過對傳統(tǒng)苯酚-硫酸法和兩種改進(jìn)的苯酚-硫酸法測定龍眼多糖的精密度、重現(xiàn)性和回收

4、率進(jìn)行比較分析后，結(jié)果顯示:三種方法的精密度都較好，其中，改良的苯酚-硫酸法的RSD是0.88％，比傳統(tǒng)法和定糖法分別小0.83％和1.24％;改良法和硫酸-苯酚定糖法的重現(xiàn)性較優(yōu)，RSD分別是3.16％和3.96％;三種方法的回收率沒有顯著差異。因此，本課題中采用改良苯酚-硫酸法測定龍眼中多糖含量，所測得龍眼多糖含量為14.64％。
　　 2、本文中以龍眼干果肉（濕基含水量12.94％）為材料，采用熱水浸提提取龍眼多糖，提取條

5、件為:溫度90℃，料液比1∶4，提取時間2h，提取次數(shù)3次。經(jīng)Sevag法除蛋白，5次后已基本無殘留蛋白。用過氧化氫法除色后，龍眼多糖溶液從渾濁褐色變成了澄清的淡黃色溶液。經(jīng)除蛋白、脫色、透析以及濃縮凍干后的龍眼多糖即是龍眼精制多糖LP，2.5Kg干龍眼肉可提取出精制多糖7.44g。接著，研究了龍眼多糖的純化工藝以及完成了純度鑒定和分子量測定工作。精制多糖LP經(jīng)DEAE-纖維素52柱層析純化得三個組分LPA、LPB、LPC，得率分別是8

6、.35％，62.36％，11.36％。得率最高的LPB經(jīng)Sephacryl S-400柱純化后得到多糖組分LPB-2-M，經(jīng)過GPC鑒定后為均一純化多糖。同時，HPGPC法測得LPB-2-M重均分子量Mw為8.0×104g·moL-1，分子量的分布范圍在2.7×104 g·moL-1與4.1×105 g·moL-1之間，而分子量在8.4×104 g·moL-1以內(nèi)的多糖占90％左右，分散系數(shù)D=1.03。
　　 3、通過一系列理

7、化性質(zhì)實驗表明，龍眼粗多糖CLP呈褐色，部分水溶，精制龍眼多糖LP和純化龍眼多糖LPB-2-M均能完全溶于水，前者呈淡黃色蓬松狀，后者為無色粉末;茚三酮反應(yīng)表明CLP中含有少量蛋白質(zhì)，而LP和LPB-2-M中幾乎沒有殘留蛋白;硫酸-咔唑反應(yīng)表明CLP、LP和LPB-2-M都含有糖醛酸;碘-碘化鉀反應(yīng)表明龍眼多糖中不含淀粉類物質(zhì)。熱分析顯示，龍眼多糖LPB-2-M具有兩次明顯的失重過程，第一個失重峰出現(xiàn)在70℃左右，失重率為10.85％，

8、第二個失重峰出現(xiàn)在226.7℃～276.5℃，失重率是38.77％，總體失重率是49.62％，說明龍眼多糖熱穩(wěn)定性良好，在230℃以下不易熱分解。
　　 4.初步研究了龍眼多糖流變類型以及濃度、pH、蔗糖、Na+和Ca2+的添加對其流變性的影響。通過穩(wěn)態(tài)剪切實驗和小振幅動態(tài)剪切實驗結(jié)果表明:龍眼多糖溶液有剪切稀釋現(xiàn)象，是非牛頓流體（亦稱假塑性流體）;龍眼多糖溶液濃度大于3％時，主要呈現(xiàn)彈性行為;pH變化對其表觀粘度影響非常明顯，

9、尤其是在堿性中大大降低，且影響是不可逆的;蔗糖、Na+和Ca2+的添加對龍眼多糖溶液的表觀粘度增加和粘彈性行為的影響有促進(jìn)作用，且與蔗糖和Ca2+的添加量有一定濃度依賴性;但蔗糖、Na+和Ca2+并不會改變流體的類型。結(jié)合分析穩(wěn)態(tài)剪切測試和小振幅動態(tài)剪切測試結(jié)果表明:龍眼多糖溶液不符合Cox-Merz規(guī)則。
　　 5.采用紫外-可見分光光度計、高效液相色譜、紅外光譜、核磁共振波譜、高碘酸氧化等手段初步分析了龍眼多糖LPB-2-M

10、的結(jié)構(gòu)。經(jīng)苯酚-硫酸法測定粗多糖CLP、精制多糖LP和LPB-2-M含糖量分別為35.26％，47.42％和84.32％;硫酸-咔唑法測得糖醛酸含量分別是0.17％，6.27％和7.61％;考馬斯亮藍(lán)法測得CLP中蛋白含量為2.1％，LP和LPB-2-M中幾乎沒有殘留蛋白。LPB-2-M單糖組成有核糖，鼠李糖，果糖，葡萄糖，阿拉伯糖，半乳糖，木糖以及半乳糖醛酸;異頭碳為β-型居多，α-型非常少，是含有1→6鍵型，也可能含有1→2，1→4