人參皂苷Rg1對優(yōu)化培養(yǎng)的人臍血MSCs增殖、分泌功能與ERK、p38信號分子的影響.pdf

1、第一部分
　　 目的：觀察兩種培養(yǎng)基序貫培養(yǎng)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(humanumbilicalcordbloodmesenchymalstemcells，hUCB-MSCs)，及其對hUCB-MSCs基本生物學(xué)特性的影響。
　　 方法：密度梯度離心法獲取臍血單個(gè)核細(xì)胞，以DMEM/F12和Oricell人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基(Oricellhumanumbilicalcordmesenchymalstemcellgrow

2、thmedium，OHUCMSCG)序貫培養(yǎng)hUCB-MSCs，免疫細(xì)胞化學(xué)及流式細(xì)胞術(shù)檢測其標(biāo)志蛋白，MTT法檢測細(xì)胞增殖，繪制生長曲線，茜素紅與油紅染色鑒定其向成骨、成脂細(xì)胞分化潛能。
　　 結(jié)果：DMEM/F12原代培養(yǎng)hUCB-MSCs，克隆形成率高，繼續(xù)用DMEM/F12傳代培養(yǎng)hUCB-MSCs至第2代，有利于利用差速貼壁方式純化細(xì)胞；第三代以后改用OHUCMSCG序貫培養(yǎng)hUCB-MSCs至第8代，細(xì)胞均呈梭形、成

3、纖維細(xì)胞樣，旋渦輻射狀排列，并表達(dá)CD29、CD44、CD73、CD166和波形蛋白，而不表達(dá)CD34和CD45：第6代hUCB-MSCs生長、增殖狀態(tài)良好，倍增時(shí)間為68.llh．對數(shù)生長期為2-5d;在適宜條件下，培養(yǎng)21d，可被誘導(dǎo)分化為骨結(jié)節(jié)茜素紅染色陽性的成骨細(xì)胞和脂滴油紅染色陽性的成脂細(xì)胞。
　　 結(jié)論：DMEM/F12和OHUCMSCG培養(yǎng)基序貫培養(yǎng)可成功培養(yǎng)hUCB-MSCs，并使其保持良好的基本生物學(xué)特性。

4、r>　　 第二部分
　　 目的：觀察人參皂苷Rg1(Rg1)對人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(humanumbilicalcordbloodmesenchymalstemcells，hUCB-MSCs)增殖的影響，以鈣敏感受體(calcium-sensingreceptor,CaSR)為靶點(diǎn)，探討Rg1可能的作用機(jī)制。
　　 方法：取P5至P6代hUCB-MSCs隨機(jī)分為8組：空白對照組、Rg1由低至高5個(gè)劑量組及Rg1+阻斷劑組

5、(CdCl2)和阻斷劑組，MTT法觀察Rg1對細(xì)胞增殖的影響，ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子含量，RT-PCR和Westemblot技術(shù)檢測hUCB-MSCsCaSR的mRNA及p-P38和p-ERK蛋白的表達(dá)；免疫熒光染色檢測CaSR受體。
　　 結(jié)果：與對照組相比，Rgl各劑量組對hUCB-MSCs的增殖無明顯影響(P>0.05):0.01mmol/LCdCl2則可明顯抑制hUCB-MSCs增殖(P

6、不能被Rg1所逆轉(zhuǎn)。與空白組比較，Rg1各劑量組培養(yǎng)上清液中的IL-8、IL-6、LIF和TGF-B1含量無顯著差異（P>0.05），但hUCB-MSCs與0.01mmol/L的CdCl2+Rg13μmol/L共同培養(yǎng)72h，上述細(xì)胞因子含量呈降低趨勢，以IL-6、LIF降低最為顯著，其余幾種細(xì)胞因子含量均低于檢測下限(P

7、及CdCl20.01mmol/L+Rg11μmol/L對hUCB-MSCsCaSRmRNA表達(dá)無明顯差異(P>O.05)a免疫熒光染色結(jié)果顯示，Rgl對CaSR表達(dá)的影響與空白對照組無顯著差別oWesternblot檢測結(jié)果顯示，與空白組比較，Rgl3μmol/L、CdCI20.01mmol/L+Rg11μmol/L合用組均可明顯降低p-ERK蛋白和p-p38蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)論：1．Rgl對hUCB-MSCs增殖和CaSR表