他汀類藥物手性中間體的生物催化工藝研究.pdf

1、他汀類藥物廣泛用于高血脂癥的治療，其手性中間體的傳統(tǒng)合成工藝復雜，成本較高。2-脫氧-D-核糖-5-磷酸醛縮酶(DERA)能催化乙醛和氯乙醛進行縮合反應，直接生成具有兩個手性中心的他汀類藥物手性中間體(4R，6S)-2，4-二羥基-6-氯甲基毗喃，為此DERA成為了當前的研究熱點。已報道的大腸桿菌DERA和其突變體催化活性不高、抗底物變性能力不強，考慮到嗜熱菌Pyrobaculumaerophilum DERA高熱穩(wěn)定性，本研究對嗜熱菌

2、Pyrobaculum aerophilum的DERA進行定向進化，以獲得高催化活性和高抗底物變性能力的生物催化劑，旨在改進他汀類藥物手性中間體的生物催化合成工藝，以提高合成效率，降低成本，簡化合成步驟，獲得更高的純度。
　　以Pyrobaculum aerophilum的DERA作為親本，然后建立易錯PCR文庫，通過建立一套快速篩選的方法，從文庫中篩選出了具有高催化活性和抗底物變性的DERAPya(I174V,187I)。

3、>　　對篩選出來的DERAPya(I174V,V187I)工程表達菌株進行高密度發(fā)酵，對發(fā)酵條件經(jīng)行優(yōu)化，獲得最佳發(fā)酵條件為:誘導時機為OD600=0.68、誘導劑IPTG終濃度為1mM、 pH為7、溫度為30℃、誘導時間為12h。
　　用發(fā)酵產(chǎn)生的DERAPya(I174V,V187I)催化乙醛和氯乙醛反應，并對其催化條件進行優(yōu)化，獲得最佳酶催化條件:緩沖體系為咪唑-磷酸體系，反應pH為6，反應溫度為25℃。
　　為解決傳