苗藥HL-1112對(duì)幽門螺桿菌抗菌活性與超微結(jié)構(gòu)及微孔蛋白基因影響的研究.pdf

1、目的：檢測(cè)HL-1112對(duì)幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）的體外抗菌活性，觀察藥物作用前后HL-1112對(duì)幽門螺桿菌超微結(jié)構(gòu)的影響及微孔蛋白基因表達(dá)水平的變化，為新藥的開發(fā)和臨床合理篩選抗Hp治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：采用瓊脂稀釋法檢測(cè)HL-1112對(duì)Hp國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序株ATCC700392的最低抑菌濃度(Minimal inhibitory concentrations，MIC)。用含不同濃度(2mg

2、/mL、1mg/mL、500μg/mL、250μg/mL)HL-1112的平板培養(yǎng)Hp，根據(jù)光鏡觀察不同時(shí)間點(diǎn)（第2、3、4、5、6天）Hp形態(tài)的改變，選擇形態(tài)改變顯著的HL-1112濃度組及時(shí)間，將實(shí)驗(yàn)分組為空白組（未經(jīng)藥物處理的Hp）、阿莫西林對(duì)照組（經(jīng)0.64μg/mL阿莫西林作用的Hp）和測(cè)試組（經(jīng)2mg/mL HL-1112作用的Hp），制備掃描和透射電鏡樣品，電鏡觀察Hp超微結(jié)構(gòu)的改變。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)HL-1

3、112作用前后，空白組（未經(jīng)藥物處理的Hp）和測(cè)試組（經(jīng)2mg/mL HL-1112作用的Hp）Hp微孔蛋白基因omp8、omp32 mRNA表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：1、苗藥HL-1112對(duì)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序株Hp ATCC700392的MIC為4mg/mL。2、在光鏡下，空白組Hp隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，由螺桿狀或短桿狀逐漸變?yōu)閁形、環(huán)形，進(jìn)而發(fā)生球變。測(cè)試組Hp，形態(tài)由斷痕螺桿狀變?yōu)殚L(zhǎng)斷痕螺桿狀，長(zhǎng)度為空白組細(xì)菌的2~3倍，并有部分細(xì)菌

4、影子殘留，同時(shí)有少量環(huán)形菌及球形菌形成，且藥物濃度越大，形態(tài)改變程度越明顯。3、在電鏡下，測(cè)試組Hp球變過程受抑制，較空白組菌體增長(zhǎng)，表面有凹陷、打孔，甚至崩解現(xiàn)象出現(xiàn)，胞質(zhì)分布不均或濃縮成團(tuán)塊狀，胞內(nèi)中心區(qū)域類核區(qū)缺失，U型Hp一側(cè)分泌一種高密度物質(zhì)。阿莫西林組Hp較空白組菌體桿狀菌居多，菌體粗細(xì)不一，多數(shù)細(xì)菌表面多處囊狀突起，細(xì)胞壁、膜破損，胞質(zhì)電子密度下降。4、熒光定量PCR結(jié)果采用2-△△CT法計(jì)算，Hp在苗藥HL-1112作用

5、后其微孔蛋白基因omp8、omp32 mRNA表達(dá)量分別較空白組上調(diào)2.339倍和2.597倍。
　　結(jié)論：
　　1、苗藥HL-1112對(duì)Hp國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序菌株ATCC700392有明顯的抑菌作用，MIC為4mg/mL。
　　2、苗藥 HL-1112通過減弱 Hp的球變能力及 Hp結(jié)構(gòu)性群體的形成，影響Hp抗逆生存的能力。
　　3、苗藥HL-1112通過破壞Hp基本結(jié)構(gòu)或者改變外膜通透性，從而可能引起細(xì)胞內(nèi)外離子平