哮喘及COPD病人氣道巨噬細(xì)胞吞噬功能及相關(guān)基因表達(dá).pdf

1、目的：初步測定慢性阻塞性肺疾病患者及哮喘患者的氣道巨噬細(xì)胞吞噬功能變化及其與吞噬功能相關(guān)基因表達(dá)。
　　 1.材料方法：
　　 1.1樣本來源:20例慢性阻塞性肺疾病患者、20例支氣管哮喘患者均為2010年10月至2011年3月在本院門診就診患者,20例健康志愿者為醫(yī)學(xué)院學(xué)生、醫(yī)務(wù)人員及住院病人家屬。入選標(biāo)準(zhǔn):慢性阻塞性肺疾病患者為處于穩(wěn)定期的患者,支氣管哮喘病人為處于非急性發(fā)作期患者以及輕中度哮喘急性發(fā)作患者,健康志愿

2、者為最近半年內(nèi)健康查體無異常發(fā)現(xiàn)者。排除標(biāo)準(zhǔn):合并肺部其他疾病及其他系統(tǒng)疾病者。與每位受試者簽訂臨床試驗(yàn)知情同意書。分為三組:見下表:
　　 1.2方法與步驟
　　 1.2.1.誘導(dǎo)痰法取得痰液。將痰液稱重(g),加入4倍痰液體積的0.1％DTT(二硫蘇糖醇),于37℃水浴鍋中震蕩搖勻15-30min,直到痰中粘液溶解。300目鋼網(wǎng)(孔徑48微米)過濾已溶解痰液,除去不溶物,將痰液轉(zhuǎn)移至60mL離心管中1500rpm離心

3、5min,取沉淀物,適量PBS洗滌1-2次。
　　 1.2.2分離巨噬細(xì)胞。向細(xì)胞沉淀加入1mL含20％小牛血清RPMI-1640液(含100 U/mL penicillin,and100μg/mL streptomycin)重懸細(xì)胞,置于二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱(5％C02,37℃)內(nèi)培養(yǎng)2h,棄上清。用PBS緩慢沖洗細(xì)胞2次(輕輕吹打,避免洗去貼壁細(xì)胞),去除未貼壁細(xì)胞。重新加入20％小牛血清RPMI-1640液(含100 U/m

4、Lpenicillin,and100μg/mL streptomycin),置二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)備用。每兩到三天更換培養(yǎng)液。
　　 1.2.3.進(jìn)行吞噬功能檢驗(yàn),比較各組吞噬熒光標(biāo)記金葡菌的吞噬指數(shù)(PI).
　　 1.2.4.實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄PCR法測定各組吞噬相關(guān)基因的表達(dá)(轉(zhuǎn)錄水平).
　　 2.結(jié)果：
　　 2.1對照組、哮喘組、COPD組的巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)(PI)分別為85±9％、73±10％、

5、78±7％,哮喘組和COPD組與對照組相比,氣道巨噬細(xì)胞的吞噬功能均受抑制(p＜0.05),其中,哮喘組較COPD組氣道巨噬細(xì)胞的吞噬功能受抑制更明顯(p＜0.05).
　　 2.2 SR-A1、MACRO、TLR2在對照組、哮喘組和COPD組的表達(dá)(轉(zhuǎn)錄水平)無明顯差別(p＞0.05),與對照組相比,TLR4在哮喘組的表達(dá)(轉(zhuǎn)錄水平)下調(diào)(p＜0.05),而在COPD組表達(dá)(轉(zhuǎn)錄水平)上調(diào)(p＜0.05)。
　　 3.