疏水蛋白與生物活性肽的融合表達(dá)及其性質(zhì)的研究.pdf

1、真菌疏水蛋白是絲狀真菌產(chǎn)生的小分子量蛋白質(zhì)，其最大特點(diǎn)是能夠在界面形成一層雙親性的蛋白膜以此來反轉(zhuǎn)所覆蓋界面的性質(zhì)。疏水蛋白HGFⅠ作為疏水蛋白家族的一個(gè)成員，具有自組裝成膜的性質(zhì)，是優(yōu)良的表面活性劑，本實(shí)驗(yàn)室對(duì)于疏水蛋白HGFⅠ有完善與系統(tǒng)的研究。
　　生物活性多肽具備巨大的應(yīng)用潛力，目前治療性多肽的研究已涉及到腫瘤、心血管疾病、糖尿病、關(guān)節(jié)炎、以及中樞系統(tǒng)疾病等各個(gè)方面，例如本文的一個(gè)研究對(duì)象——一類廣譜抑菌素乳酸片球菌素(p

2、ediocin)，它能能抑制絕大多數(shù)革蘭陽性菌的生長(zhǎng)，針對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）菌屬效果尤佳;本文另一個(gè)研究對(duì)象是一類含十個(gè)氨基酸殘基的寡肽CTT(CTTHWGFTLC)，它能準(zhǔn)確定位于腫瘤新生血管的發(fā)生部位。這些生物活性肽對(duì)于解決諸如抗生素耐藥性與靶向腫瘤治療等難題有巨大的應(yīng)用價(jià)值。然而這些生物活性肽距離臨床治療還有很長(zhǎng)的距離，原因就是多肽本身的許多特征和因素限制了其應(yīng)用效果，例如半衰期短

3、，易被酶類降解，無特異性等等。
　　因此，用具有雙親性質(zhì)的真菌輸水蛋白HGFⅠ對(duì)生物活性肽進(jìn)行修飾以補(bǔ)償其應(yīng)用缺陷非常有意義。——本研究中，以pediocin和CTT兩個(gè)生物活性肽為例，可以利用疏水蛋白HGFⅠ將pediocin在作用位點(diǎn)富集，并且自組裝成有極性的膜，以實(shí)現(xiàn)生肉類產(chǎn)品對(duì)空氣中的腐敗菌單核細(xì)胞增生李斯特菌菌屬細(xì)菌的預(yù)防效果，或者利用CTT與HGFⅠ融合工程蛋白實(shí)現(xiàn)抗腫瘤藥物靶向定位的效果等等，為疏水蛋白HGFⅠ對(duì)生物

4、活性肽的修飾提供必要的指導(dǎo)與借鑒。
　　文章涉及的工作從分子生物學(xué)手段上游起始，分別進(jìn)行了HGFⅠ、pediocin、CTT片段的獲得工作，實(shí)現(xiàn)了融合片段在大腸桿菌內(nèi)克隆載體的構(gòu)建。隨后采用異源表達(dá)，利用畢赤酵母真核表達(dá)系統(tǒng)將融合片段轉(zhuǎn)入酵母菌株GS115中進(jìn)行真核表達(dá)，所用三個(gè)融合蛋白的表達(dá)載體pPIC9也有穿梭載體的性質(zhì)。真核表達(dá)采用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)，這個(gè)系統(tǒng)由于簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)、表達(dá)量高、易于控制等優(yōu)勢(shì)成為本研究針對(duì)質(zhì)粒重組和外源蛋