PI3K-mTOR抑制劑BEZ235在MGMT陽(yáng)性的膠質(zhì)瘤細(xì)胞治療的研究.pdf

1、神經(jīng)膠質(zhì)瘤是具有高度惡性,高侵襲性的原發(fā)腦腫瘤。多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)是最常見、最致命的。目前主流的治療方法是多種方法結(jié)合處理,一些適當(dāng)?shù)妮o助治療會(huì)延長(zhǎng)患者的生存預(yù)期。
　　目前的神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療包括在安全情況下最大限度的切除腫瘤,聯(lián)合術(shù)后放療及口服DNA烷化劑。替莫唑胺(TMZ)的療效根據(jù)GBM的組織來(lái)源及甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)啟動(dòng)子的甲基化的情況有所不同。NVP-BEZ235被證明在體內(nèi)和體外是通過(guò)抑制自

2、噬和增加細(xì)胞凋亡提高 TMZ對(duì)惡性膠質(zhì)瘤的療效。PI3K參與NF-κB-MGMT調(diào)節(jié)。也有將PI3K抑制劑與TMZ聯(lián)合治療以提高療效的研究。PI3K抑制劑能夠抑制腫瘤生長(zhǎng)。因?yàn)楝F(xiàn)階段PI3K抑制的研究,BEZ235作為一個(gè)具有潛在抗腫瘤的藥物已經(jīng)作為第一批PI3K抑制劑作為臨床試驗(yàn)中。本研究主要目的在于測(cè)試在耐化療的MGMT陽(yáng)性的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中TMZ和BEZ235聯(lián)合治療是否比單獨(dú)BEZ及TMZ治療抗腫瘤活性更加有效。
　　本課題

3、從三個(gè)方面對(duì)PI3K抑制劑BEZ235在MGMT陽(yáng)性的膠質(zhì)瘤細(xì)胞治療的研究:1.PI3K/Akt/mTOR抑制劑之一NVP-BEZ235對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響。2. BEZ235對(duì)相關(guān)腫瘤細(xì)胞甲基化和非甲基化程度的影響。3.比較細(xì)胞系各處理組中MGMT蛋白表達(dá)情況。
　　目的:
　　探討MGMT陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞系與MGMT陰性細(xì)胞腫瘤細(xì)胞系之間TMZ治療效果差距,同時(shí)通過(guò)對(duì)PI3K/mTOR抑制劑的NVP-BEZ235聯(lián)合常規(guī)膠質(zhì)

4、瘤化療藥物TMZ聯(lián)合運(yùn)用,研究不同情況下聯(lián)合處理后是否能提高對(duì)耐TMZ的MGMT陽(yáng)性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的治療效果。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)選取MGMT陽(yáng)性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系T98G及MGMT陰性細(xì)胞系A(chǔ)172,將對(duì)數(shù)期的細(xì)胞接種于6孔板、96孔板中,實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,在A172腫瘤細(xì)胞系內(nèi),使用 TMZ處理組及不使用藥物組。T98G細(xì)胞系內(nèi),對(duì)照組不使用任何藥物,處理組又分為單獨(dú)使用抗腫瘤藥物 TMZ組,單獨(dú)使用 PI3K/Akt抑

5、制劑 BEZ235組,TMZ聯(lián)合PI3K/Akt抑制劑BEZ235組。1.在24,48,72小時(shí)處理時(shí)間中使用MTT法分析腫瘤細(xì)胞系個(gè)實(shí)驗(yàn)組增殖抑制率,了解各組處理后細(xì)胞增殖抑制率的效果及程度。2.使用Methylation PCR比較T98G、A172各自單獨(dú)使用TMZ處理組,及T98G中TMZ聯(lián)合BEZ235處理組各組的MGMT基因的甲基化及非甲基化程度。3.量化處理,使用Western Blot實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)上部分中各組的MGMT

6、Protein表達(dá)及分析統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.TMZ在MGMT陽(yáng)性細(xì)胞系T98G中效果明顯較A172細(xì)胞系差,在TMZ聯(lián)合使用不同濃度的BEZ235處理中,效果均較單獨(dú)TMZ使用效果好。2. Methylation PCR量化處理結(jié)果提示T98G組中TMZ聯(lián)合BEZ235處理效果較單獨(dú)使用TMZ的A172和T98G的抑制率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.量化免疫印跡(Western Blot)實(shí)驗(yàn)結(jié)果后,各實(shí)驗(yàn)組MGMT蛋白

7、含量的表達(dá)也符合甲基化PCR的結(jié)果,提示了BEZ235處理后明顯的減少了T98G細(xì)胞中MGMT的去甲基化程度。
　　結(jié)論:
　　1.MGMT陽(yáng)性細(xì)胞系中單獨(dú)使用TMZ效果不佳,聯(lián)合使用BEZ235后,效果較單獨(dú)使用增強(qiáng),其增強(qiáng)效果存在時(shí)間及濃度依賴特點(diǎn);單獨(dú)使用BEZ235也對(duì)T98G細(xì)胞存在細(xì)胞殺傷性。
　　2.在T98G細(xì)胞系中,BEZ235聯(lián)合TMZ處理顯示更強(qiáng)細(xì)胞毒性,提示BEZ235可通過(guò)NF-κB-MGMT