糖基化終末產(chǎn)物致腎臟損傷與鈉氫交換蛋白1關(guān)系探討.pdf

1、目的:探討糖基化終末產(chǎn)物（簡稱AGEs）致腎損傷的作用與胞漿膜鈉氫交換蛋白1（NHE-1）的關(guān)系。 方法: （1）離體腎皮質(zhì)薄片孵育實驗：按文獻方法制備腎皮質(zhì)薄片，實驗分7組：①正常對照組；②牛血清白蛋白組（Bovine serum albumin， BSA200μg/ml）；③ AGEs組（AGEs200μg/ml）；④Cariporide對照組（Cariporide1μmol/ml）；⑤～⑥AGEs+Caripori

2、de組（AGEs200μg/ml， Cariporide0.1或1μmol/ml）；⑦AGEs+anti-RAGE組（AGEs200μg/ml，anti-RAGE5μg/ml）。將薄片放入含DMEM/F12培養(yǎng)液（充95％ O25％ CO2，37℃）的孵育瓶中，每瓶放10 mg（約7-8片）薄片，與處理因素共孵120 min后，收集腎薄片和孵育液，分別檢測腎皮質(zhì)和孵育液中的生化指標(biāo)。 （2）在體動物實驗：取正常SD大鼠40只，隨

3、機抽取8只大鼠暴露左側(cè)腎臟后縫合作為假手術(shù)組。其余32只大鼠切除左側(cè)腎臟后隨機分成4組，即BSA組、AGEs損傷組、Cariporide治療組、N-acetylcysteine（NAC）治療組。術(shù)后兩周開始給藥，Cariporide治療組、NAC治療組和AGEs損傷組大鼠每天給予尾靜脈注AGEs（100 mg/kg），同時分別給予Cariporide（1 mg/kg）、NAC（200 mg/kg）或等體積的生理鹽水灌胃。假手術(shù)組和BSA

4、組大鼠尾靜脈注射BSA（100 mg/kg）和灌胃等體積生理鹽水。持續(xù)給藥12周，處死前三天用代謝籠收集尿液，離心后取上清液檢測大鼠24h尿蛋白、轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β1）排泄率、尿肌酐。處死前禁食8小時，稱重后，取血分離血漿儲存于-20℃冰箱用以檢測血肌酐，血尿素氮。取右腎，吸干稱重，用以檢測腎皮質(zhì)組織中MDA濃度、GSH含量、NHE-1和TGF-β mRNA水平，HE染色進行腎皮質(zhì)組織形態(tài)學(xué)觀察。 結(jié)果: （1）離

5、體腎薄片實驗：在AGEs作用下，腎皮質(zhì)組織中乳酸脫氫酶（LDH）漏出率，丙二醛（MDA）濃度和鈉氫交換蛋白1（NHE-1）活性明顯增加，還原型谷胱甘肽（GSH）含量明顯降低。高、低濃度的Cariporide能顯著抑制AGEs引起的LDH漏出率、MDA濃度和NHE-1活性的增加，阻止GSH含量的降低。anti-RAGE也能抑制AGEs誘導(dǎo)的腎皮質(zhì)損傷，單獨的Cariporide和BSA對腎皮質(zhì)組織中的生化指標(biāo)無明顯影響。 （2）在

6、體動物實驗：大鼠尾靜脈注射AGEs12周后，AGEs損傷組動物體重明顯減輕、腎臟肥大指數(shù)、血尿素氮和肌酐水平，24h尿蛋白和TGF-β1排泄率明顯增加，肌酐清除率下降；腎皮質(zhì)組織中MDA濃度增加，NHE-1和TGF-β1 mRNA水平增加，GSH含量下降，與假手術(shù)組及手術(shù)加BSA組相比，均有顯著性差異。Cariporide治療組大鼠體重下降不明顯，腎臟肥大指數(shù)、24h尿蛋白、血尿素氮、血肌酐和TGF-β1排泄率較AGEs損傷組明顯降低，

7、肌酐清除率顯著提高；Cariporide抑制了AGEs誘導(dǎo)的腎皮質(zhì)組織中MDA濃度的升高、NHE-1和TGF-β1 mRNA表達的增加，保護了GSH含量，與AGEs損傷組相比，均有顯著性差異。組織形態(tài)學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，AGEs損傷組大鼠的腎小球體積增大、細胞外基質(zhì)增多、細胞增生、球囊粘連、腎小球出現(xiàn)纖維化和硬化。Cariporide治療組大鼠的腎小球結(jié)構(gòu)清晰，未見球囊粘連、腎小球纖維化和硬化出現(xiàn)。手術(shù)加BSA組與假手術(shù)組相比，除腎臟肥大指數(shù)輕

8、度增加外，其他各項指標(biāo)均無明顯差異，其腎小球結(jié)構(gòu)清晰，無球囊粘連，未見腎小球纖維化出現(xiàn)。 結(jié)論: 1.AGEs與腎皮質(zhì)薄片體外孵育，能直接誘導(dǎo)腎皮質(zhì)組織的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和腎皮質(zhì)組織的損傷。 2.外源性給予AGEs能引起在體大鼠腎臟損傷。 3.Cariporide在體內(nèi)、體外對AGEs引起腎皮質(zhì)組織損傷和在體大鼠腎損傷均有顯著保護作用。 4.AGEs引起大鼠腎損傷的機制可能是通過AGEs/RAGE間