α-synuclein和γ-synuclein結(jié)構與功能的初步研究.pdf

1、Synuclein家族是近年來在脊椎動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一個同源性較高的蛋白家族.這個蛋白家族已知包括三個成員:α-synuclein,β-synuclein和γ-synuclein.A-synuclein的突變體與罕見的家族性的早發(fā)性帕金森病有關,而且,野生型的未突變的α-synuclein會在帕金森病,阿爾茨海默氏病和其他的一些神經(jīng)退行性疾病中發(fā)生不正常的沉積.而在散發(fā)性的帕金森病人的中樞神經(jīng)系統(tǒng),則只含有未突變的野生型α-synucle

2、in.在尚無較好思路來進一步研究α-synuclein的生理功能以及它和兩種突變體在神經(jīng)退行性疾病過程中的作用分子機制之前,進行蛋白結(jié)晶并解析它們的結(jié)構,近而從結(jié)構推測它們的功能及在疾病發(fā)生中所起的作用不失為一個好的策略.我們成功的從人四月胎腦組織提取的RNA中通過RT-PCR方法獲得了α-synuclein.并把它構建進入pGEX-4T-1表達載體中,通過表達純化和結(jié)晶,得到了α-synuclein蛋白的晶體.同時,體外獲得了存在于早

3、發(fā)性家族性帕金森病人神經(jīng)元內(nèi)的突變體之一A53T α-synuclein的cDNA克隆.人們對于γ-synuclein的生理功能和病理作用也了解甚少,我們期望從尋找它的相互作用蛋白入手,探討它是否與某種信號通路相關或者是同細胞骨架與核骨架有關.為此,我們從人四月胎腦組織提取的RNA中通過RT-PCR的方法獲得了γ-synuclein的全長cDNA,構建了pGEX-4T-1-γ-synuclein表達載體并表達純化了該蛋白.我們同時提取了

4、健康腦組織蛋白,用純化好的GST-SNCG融合蛋白及GST蛋白進行GST-PULLDOWN實驗,在SDS-PAGE凝膠電泳分析后,得到了兩條差異顯著的蛋白條帶.我們在對差異蛋白的質(zhì)譜分析后得到了兩個蛋白,分別是crystallin alphaB和AHI-1.現(xiàn)已發(fā)現(xiàn),γ-synuclein在不同組織及不同組織的良、惡性狀態(tài)之間,表達差異較大.我們猜測:γ-synuclein在健康腦組織和腦膠質(zhì)細胞瘤組織之間的表達差異是由CpG島的甲基化