分泌腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的骨髓間充質(zhì)干細胞對慢性神經(jīng)病理性疼痛大鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng)研究.pdf

1、目的：檢測大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)分泌腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的量 以及觀察MSCs鞘內(nèi)移植對大鼠神經(jīng)病理性疼痛的作用。
　　 方法：1.骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)生物學(xué)特性的研究：體外分離純化培養(yǎng)MSCs，并從貼壁性、表面標志物及體外向神經(jīng)元誘導(dǎo)分化三方面進行鑒定。對第3代、第6代和第10代細胞的生長曲線進行對比，分析其增殖能力。ELISA法分別檢測第1代至第5代MSCs培養(yǎng)上清液中的BDNF的濃度。2. Br

2、du體外標記骨髓間充質(zhì)干細胞的陽性率檢測：用10umol/l的Brdu分別標記MSCs12h、48h、72h，免疫組織化學(xué)檢測各組陽性細胞的標記率。3.鞘內(nèi)移植骨髓間充質(zhì)干細胞對神經(jīng)病理性大鼠痛行為學(xué)的影響與評價：以未作任何處理的大鼠作為Naive組，建立大鼠保留性神經(jīng)損傷(spared nerve injury，SNI)模型，隨機分為2組：移植對照細胞組(SNI/Control組)、細胞移植組(SNI/MSCs組)。SNI/MSCs組

3、大鼠于SNI 術(shù)后1周移植MSCs，SNI/Control組注射等體積PBS。于SNI 術(shù)前、SNI術(shù)后1周至移植后4周每周測定各組大鼠的機械縮爪閾值(Mechanical withdrawalthreshold，MWT)和輻射熱抬腳時間(Thermal withdrawal duration，TWD)；并于移植后4周取各組大鼠脊髓，免疫組織化學(xué)檢測組織中BDNF表達及BrdU陽性細胞，同時行HE染色，檢測植入細胞的致瘤性。
　　

4、 結(jié)果：1.骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)生物學(xué)特性：體外成功分離并純化了MSCs，第三代細胞經(jīng)鑒定純化率高達99％。前10代的細胞增長旺盛，生長曲線呈現(xiàn)典型的“S”型，之后增長速度有所減慢。隨著細胞培養(yǎng)代數(shù)的增加，培養(yǎng)液中BDNF的濃度也明顯增加與培養(yǎng)代數(shù)呈正相關(guān)趨勢。2.隨著標記時間的延長，Brdu陽性細胞的標記率也增加。48h組陽性細胞的標記率為 96.2％，與72h組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，對細胞的形態(tài)無明顯影響。

5、3. 鞘內(nèi)移植骨髓間充質(zhì)干細胞對神經(jīng)病理性大鼠痛行為學(xué)的影響：SNI 術(shù)后1周大鼠結(jié)扎側(cè)后足出現(xiàn)痛覺異常現(xiàn)象，表現(xiàn)為不同程度的機械縮爪閾值(MWT)降低和熱抬腳時間(TWD)延長(P<0.05)；MSCs組大鼠移植后1周即出現(xiàn)大鼠疼痛行為學(xué)癥狀減輕，MWT 增加和TWD 縮短；同時移植后2-4周，SNI/MSCs組大鼠和SNI/Control組組相比，MWT 增加(P<0.05)，TWD 縮短(P<0.05)。細胞移植后4周，脊髓組織中