腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子轉(zhuǎn)染脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠急性脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過(guò)觀察行BDNF基因修飾后,大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)變化;并將其應(yīng)用于急性脊髓損傷大鼠的治療,觀察大鼠運(yùn)動(dòng)功能的變化,追蹤移植細(xì)胞在體內(nèi)遷移及及脊髓損傷部位生長(zhǎng)分化情況,檢測(cè)組織學(xué)改變和神經(jīng)生長(zhǎng)因子的表達(dá),探討B(tài)DNF轉(zhuǎn)染脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞用于大鼠急性脊髓損傷的可行性及可能機(jī)制。
　　方法:選擇實(shí)驗(yàn)大鼠,分離大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察其生物學(xué)特征,行BrdU標(biāo)記以利于移植后體內(nèi)示蹤,并行腺病毒BDNF基因轉(zhuǎn)染。36只

2、SD大鼠隨機(jī)分為三組:脊髓損傷對(duì)照組、ADSCs治療組及BDNF轉(zhuǎn)染的ADSCs治療組。在脊髓損傷部位行相應(yīng)處理:A組動(dòng)物,植入明膠海綿;B組動(dòng)物,植入含3.0ml(3x107個(gè)/ml) ADSCs的明膠海綿;C組動(dòng)物:植入含3.0ml(3x107個(gè)/ml)轉(zhuǎn)染ADSCs的明膠海綿。術(shù)后第28d麻醉處死所有動(dòng)物,取損傷部位脊髓組織,部分用于HE染色,普通光鏡下觀察組織學(xué)改變;部分處理后行免疫熒光染色;另一部分深低溫保存行BDNF表達(dá)檢查

3、。
　　結(jié)果:成功分離并培養(yǎng)ADSCs,可于體外穩(wěn)定增殖。對(duì)ADSCs行不同濃度的BrdU標(biāo)記,其中10、15μmol/L組標(biāo)記率相較20、25、30μmol/L組較低。BrdU標(biāo)記率在48h時(shí)標(biāo)記率達(dá)到多可達(dá)到90％以上。脊髓損傷后1d,三組間動(dòng)物運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。術(shù)后7天、14天、28天,各組大鼠的BBB評(píng)分逐漸增高,其中BDNF-ADSCs組運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分明顯高于其他兩組。組織學(xué)結(jié)果顯示脊髓損傷組脊髓

4、有空洞形成,神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量較少;ADSCs組受損局部空洞較小,神經(jīng)元細(xì)胞較多;脊髓損傷轉(zhuǎn)染細(xì)胞治療組脊髓組織結(jié)構(gòu)正常,胞體和突起清晰可見(jiàn),神經(jīng)元形態(tài)完好。免疫熒光顯示,移植脂肪干細(xì)胞脊髓組織內(nèi),均不同程度的可見(jiàn)分布有BrdU陽(yáng)性標(biāo)記細(xì)胞;熒光染色提示部分BrdU陽(yáng)性的移植細(xì)胞同時(shí)呈GFAP陽(yáng)性。Western-Blot結(jié)果顯C組BDNF表達(dá)水平明顯升高(P<0.05)表達(dá)量最高。B組表達(dá)水平較高,A組表達(dá)水平最低(P<0.05)。