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1、目的: 通過(guò)枸杞調(diào)節(jié)慢性心理應(yīng)激大鼠海馬組織中谷氨酸受體NMDAR2和谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST表達(dá)水平的測(cè)定,探討枸杞對(duì)慢性心理應(yīng)激大鼠的調(diào)節(jié)及保護(hù)作用,進(jìn)一步探討慢性心理應(yīng)激對(duì)大鼠中樞海馬損傷的分子機(jī)制,同時(shí)為開發(fā)利用我區(qū)的特色中藥材——枸杞提供科學(xué)理論依據(jù)。 方法: 健康成年SD大鼠96只,雌雄各半,體重為180~220g(由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。采用慢性復(fù)合應(yīng)激方法(束縛+噪聲)制備大鼠慢性心
2、理應(yīng)激模型,并且以枸杞作為調(diào)節(jié)因素。隨機(jī)分為8組,每組12只。①對(duì)照組;②慢性心理應(yīng)激組;③2.0g/kg枸杞組(枸杞低劑量組);④4.0g/kg枸杞組(枸杞中劑量組);⑤6.0g/kg枸杞組(枸杞高劑量組);⑥2.0g/kg枸杞+應(yīng)激組(枸杞低劑量+應(yīng)激組);⑦4.0g/kg枸杞+應(yīng)激組(枸杞中劑量+應(yīng)激組);⑧6.0g/kg枸杞+應(yīng)激組(枸杞高劑量+應(yīng)激組)。采用組織病理學(xué)技術(shù)和透射電鏡技術(shù)觀察大鼠中樞海馬神經(jīng)細(xì)胞的損傷;利用免疫組
3、織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)海馬谷氨酸受體NMDAR2和谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST的表達(dá)水平;運(yùn)用放射免疫法測(cè)定實(shí)驗(yàn)大鼠血清皮質(zhì)醇的含量;通過(guò)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)觀察大鼠的行為學(xué)變化。 結(jié)果: (1)各組實(shí)驗(yàn)大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)CA3區(qū)(HE染色)測(cè)定結(jié)果:與對(duì)照組相比,應(yīng)激組大鼠CA3區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)明顯減少(P<0.05),光鏡下觀察細(xì)胞間隙增寬,排列不整齊,細(xì)胞與周圍組織聯(lián)系疏松,錐體細(xì)胞有腫脹,部分胞核固縮呈三角形或不規(guī)則形;電鏡下觀察神
4、經(jīng)元細(xì)胞核膜不清、固縮,核明顯固縮,胞質(zhì)出現(xiàn)空泡樣變性,線粒體嵴斷裂;與應(yīng)激組相比,枸杞低劑量+應(yīng)激組、枸杞中劑量+應(yīng)激組和枸杞高劑量+應(yīng)激組大鼠海馬CA3區(qū)細(xì)胞數(shù)量明顯增加(P<0.05),光鏡下觀察錐體細(xì)胞形態(tài)明顯優(yōu)于應(yīng)激組,偶有染色質(zhì)邊集、胞核固縮呈三角形;電鏡下觀察偶見線粒體輕度腫脹,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張、脫顆粒,細(xì)胞膜、核膜皺縮等。(2)海馬組織谷氨酸受體NMDAR2表達(dá)測(cè)定結(jié)果:與對(duì)照組相比,應(yīng)激組大鼠海馬組織CA1區(qū)、CA3
5、區(qū)和DG區(qū)谷氨酸受體NMDAR2表達(dá)均明顯增加(P<0.05);與應(yīng)激組相比,枸杞低劑量+應(yīng)激組、枸杞中劑量+應(yīng)激組和枸杞高劑量+應(yīng)激組大鼠海馬組織CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG區(qū)谷氨酸受體NMDAR2表達(dá)均明顯降低(P<0.05)。(3)海馬組織谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST表達(dá)測(cè)定結(jié)果:與對(duì)照組相比,應(yīng)激組大鼠海馬組織CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG區(qū)谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST表達(dá)均明顯增加(P<0.05);與應(yīng)激組相比,枸杞低劑量+應(yīng)激組、枸杞中劑量+應(yīng)激
6、組和枸杞高劑量+應(yīng)激組大鼠海馬組織CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG區(qū)谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST表達(dá)均明顯降低(P<0.05)。(4)體重、血清皮質(zhì)醇和行為測(cè)定結(jié)果:與對(duì)照組相比,應(yīng)激組大鼠實(shí)驗(yàn)后體重及體重增長(zhǎng)量明顯降低(P<0.05),血清皮質(zhì)醇含量明顯升高(P<0.05),中央格停留時(shí)間和不動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.05),穿格數(shù)、直立次數(shù)、修飾時(shí)間和掙扎次數(shù)明顯減少(P<0.05);與應(yīng)激組相比,枸杞中劑量+應(yīng)激組大鼠體重增長(zhǎng)量明顯升高(P<0.
7、05),枸杞中劑量+應(yīng)激組和枸杞高劑量+應(yīng)激組血清皮質(zhì)醇含量明顯降低(P<0.05),中央格停留時(shí)間和不動(dòng)時(shí)間明顯縮短(P<0.05),穿格數(shù)、直立次數(shù)、修飾時(shí)間和掙扎次數(shù)明顯增加(P<0.05)。同時(shí),枸杞和慢性心理應(yīng)激對(duì)大鼠直立次數(shù)、血清皮質(zhì)醇、海馬CA3區(qū)錐體細(xì)胞數(shù)、海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG區(qū)谷氨酸受體NMDAR2和谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST的表達(dá)均存在交互作用。 結(jié)論: 枸杞能夠減緩慢性心理應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞的
8、損傷,使大鼠海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG區(qū)谷氨酸受體NMDAR2和谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST表達(dá)水平均明顯降低,降低慢性心理應(yīng)激大鼠的血清皮質(zhì)醇水平,使慢性心理應(yīng)激大鼠體重增長(zhǎng)量明顯增加,改善大鼠抑郁樣行為,有效減緩心理應(yīng)激水平。其可能的作用機(jī)制是:慢性心理應(yīng)激通過(guò)HPA-Glu -NMDAR途徑,損害海馬等腦結(jié)構(gòu)。枸杞能夠有效地調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)(HPA)軸的適應(yīng)性和神經(jīng)內(nèi)分泌功能,使GCs水平下降,促使NMDAR2和GLAST
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