NMDAR2和GLAST在慢性心理應激大鼠海馬中的表達及枸杞的調(diào)控研究.pdf

1、目的： 通過枸杞調(diào)節(jié)慢性心理應激大鼠海馬組織中谷氨酸受體NMDAR2和谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLAST表達水平的測定，探討枸杞對慢性心理應激大鼠的調(diào)節(jié)及保護作用，進一步探討慢性心理應激對大鼠中樞海馬損傷的分子機制，同時為開發(fā)利用我區(qū)的特色中藥材——枸杞提供科學理論依據(jù)。 方法： 健康成年SD大鼠96只，雌雄各半，體重為180~220g（由西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供）。采用慢性復合應激方法（束縛+噪聲）制備大鼠慢性心

2、理應激模型，并且以枸杞作為調(diào)節(jié)因素。隨機分為8組，每組12只。①對照組；②慢性心理應激組；③2.0g/kg枸杞組（枸杞低劑量組）；④4.0g/kg枸杞組（枸杞中劑量組）；⑤6.0g/kg枸杞組（枸杞高劑量組）；⑥2.0g/kg枸杞+應激組（枸杞低劑量+應激組）；⑦4.0g/kg枸杞+應激組（枸杞中劑量+應激組）；⑧6.0g/kg枸杞+應激組（枸杞高劑量+應激組）。采用組織病理學技術和透射電鏡技術觀察大鼠中樞海馬神經(jīng)細胞的損傷；利用免疫組

3、織化學技術檢測海馬谷氨酸受體NMDAR2和谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLAST的表達水平；運用放射免疫法測定實驗大鼠血清皮質(zhì)醇的含量；通過曠場實驗和懸尾實驗觀察大鼠的行為學變化。 結果： （1）各組實驗大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)CA3區(qū)（HE染色）測定結果：與對照組相比，應激組大鼠CA3區(qū)錐體細胞數(shù)明顯減少（P<0.05），光鏡下觀察細胞間隙增寬，排列不整齊，細胞與周圍組織聯(lián)系疏松，錐體細胞有腫脹，部分胞核固縮呈三角形或不規(guī)則形；電鏡下觀察神

4、經(jīng)元細胞核膜不清、固縮，核明顯固縮，胞質(zhì)出現(xiàn)空泡樣變性，線粒體嵴斷裂；與應激組相比，枸杞低劑量+應激組、枸杞中劑量+應激組和枸杞高劑量+應激組大鼠海馬CA3區(qū)細胞數(shù)量明顯增加（P<0.05），光鏡下觀察錐體細胞形態(tài)明顯優(yōu)于應激組，偶有染色質(zhì)邊集、胞核固縮呈三角形；電鏡下觀察偶見線粒體輕度腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張、脫顆粒，細胞膜、核膜皺縮等。（2）海馬組織谷氨酸受體NMDAR2表達測定結果：與對照組相比，應激組大鼠海馬組織CA1區(qū)、CA3

5、區(qū)和DG區(qū)谷氨酸受體NMDAR2表達均明顯增加（P<0.05）；與應激組相比，枸杞低劑量+應激組、枸杞中劑量+應激組和枸杞高劑量+應激組大鼠海馬組織CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG區(qū)谷氨酸受體NMDAR2表達均明顯降低（P<0.05）。（3）海馬組織谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLAST表達測定結果：與對照組相比，應激組大鼠海馬組織CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG區(qū)谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLAST表達均明顯增加（P<0.05）；與應激組相比，枸杞低劑量+應激組、枸杞中劑量+應激

6、組和枸杞高劑量+應激組大鼠海馬組織CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG區(qū)谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLAST表達均明顯降低（P<0.05）。（4）體重、血清皮質(zhì)醇和行為測定結果：與對照組相比，應激組大鼠實驗后體重及體重增長量明顯降低（P<0.05），血清皮質(zhì)醇含量明顯升高（P<0.05），中央格停留時間和不動時間明顯延長（P<0.05），穿格數(shù)、直立次數(shù)、修飾時間和掙扎次數(shù)明顯減少（P<0.05）；與應激組相比，枸杞中劑量+應激組大鼠體重增長量明顯升高（P<0.

7、05），枸杞中劑量+應激組和枸杞高劑量+應激組血清皮質(zhì)醇含量明顯降低（P<0.05），中央格停留時間和不動時間明顯縮短（P<0.05），穿格數(shù)、直立次數(shù)、修飾時間和掙扎次數(shù)明顯增加（P<0.05）。同時，枸杞和慢性心理應激對大鼠直立次數(shù)、血清皮質(zhì)醇、海馬CA3區(qū)錐體細胞數(shù)、海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG區(qū)谷氨酸受體NMDAR2和谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLAST的表達均存在交互作用。 結論： 枸杞能夠減緩慢性心理應激大鼠海馬神經(jīng)細胞的

8、損傷，使大鼠海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG區(qū)谷氨酸受體NMDAR2和谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLAST表達水平均明顯降低，降低慢性心理應激大鼠的血清皮質(zhì)醇水平，使慢性心理應激大鼠體重增長量明顯增加，改善大鼠抑郁樣行為，有效減緩心理應激水平。其可能的作用機制是：慢性心理應激通過HPA-Glu -NMDAR途徑，損害海馬等腦結構。枸杞能夠有效地調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)（HPA）軸的適應性和神經(jīng)內(nèi)分泌功能，使GCs水平下降，促使NMDAR2和GLAST