不同化療模式對(duì)荷人卵巢癌裸鼠及其移植瘤的影響.pdf

1、目的:
　　利用人卵巢上皮性癌（簡(jiǎn)稱卵巢癌）細(xì)胞株SKOV3建立裸鼠異種移植瘤模型，分別給予順鉑(DDP)最大可耐受劑量化療(maximum tolerateddose chemotherapy, MTD)及順鉑低劑量節(jié)拍化療(low-dose metronomicchemotherapy，LDM)，觀察兩種化療模式對(duì)荷人卵巢癌細(xì)胞SKOV3裸鼠及其移植瘤的影響，并探討其對(duì)乳腺癌耐藥蛋白(breast cancer resista

2、ntprotein，BCRP)、肺耐藥蛋白（lung resistance protein，LRP）、p-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)、增殖細(xì)胞核抗原Ki-67及腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物CD133表達(dá)水平的影響。
　　方法:
　　1建立裸鼠異體移植瘤模型:體外培養(yǎng)SKOV3細(xì)胞，將1×107細(xì)胞重懸于0.2ml PBS中，接種于6-8周齡雌性裸鼠大腿外側(cè)皮下，建立裸鼠異體移植瘤模型。
　　2當(dāng)腫瘤體積達(dá)到1

3、50mm3-200mm3時(shí)，將36只裸鼠隨機(jī)分為三組，每組12只:順鉑最大可耐受劑量組(MTD-DDP組)，DDP3mg/kg，1次/3日，腹腔注射，共6次;順鉑低劑量節(jié)拍化療組(LDM-DDP組)，DDP1mg/kg，1次/日，腹腔注射，共18次;對(duì)照組，等量生理鹽水腹腔注射。
　　3化療期間觀察裸鼠的一般情況（皮膚顏色、皮下脂肪含量、活動(dòng)情況）和腫瘤生長(zhǎng)狀況，每3天測(cè)量裸鼠皮下移植瘤體積、記錄體重及鼠糧重量，每6天采尾靜脈血液

4、進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)?；熤衅冢ㄗ曰煯?dāng)日起第9天）和化療結(jié)束（自化療當(dāng)日起第18天）分別計(jì)算兩化療組抑瘤率。
　　4化療中期及化療結(jié)束，每組分別采用戊巴比妥過量麻醉處死6只裸鼠，無菌條件下剝除裸鼠皮下移植瘤，使用Western Blot方法檢測(cè)各組移植瘤組織中P-gp、BCRP、LRP、Ki-67、CD133的表達(dá)。取出裸鼠內(nèi)臟進(jìn)行HE染色，觀察裸鼠內(nèi)臟有無微小轉(zhuǎn)移灶及有無組織形態(tài)學(xué)改變。
　　5統(tǒng)計(jì)方法:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用

5、SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，三組以上比較采用方差分析，組間差異比較采用LSD法、Dunnett T3法;兩組數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn);以P＜0.05作為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:
　　1裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)情況
　　自化療第1日至18日，對(duì)照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠皮下移植瘤處于持續(xù)增大狀態(tài)，且化療結(jié)束與化療中期比較，各組移植瘤體積均增大(P=0.000，P=

6、0.001，P=0.010)。但兩化療組皮下移植瘤增長(zhǎng)速度較對(duì)照組明顯減慢?；煹?天，與對(duì)照組比較，MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠皮下移植瘤增長(zhǎng)速度明顯減慢，LDM-DDP組移植瘤體積小于對(duì)照組(P=0.022)，但MTD-DDP組移植瘤體積與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.215)?；?天至18天，MTD-DDP組和LDM-DDP組皮下移植瘤增長(zhǎng)速度均明顯減慢。化療中期，MTD-DDP組、LDM-DDP組移植瘤體積均小于對(duì)

7、照組（P=0.047，P=0.002），LDM-DDP組與MTD-DDP組移植瘤體積差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.158)。兩組抑瘤率分別為31.32％、47.39％。化療結(jié)束，MTD-DDP組、LDM-DDP組移植瘤體積均小于對(duì)照組(P=0.020，P=0.000)，其中LDM-DDP組移植瘤體積顯著小于MTD-DDP組(P=0.004)。MTD-DDP組抑瘤率為27.00％，LDM-DDP組抑瘤率為54.29％。
　　2裸鼠一般狀

8、況及化療副反應(yīng)評(píng)估
　　2.1裸鼠一般狀況評(píng)估
　　自化療第1日至18日，各組裸鼠一般狀況良好，未發(fā)現(xiàn)活動(dòng)減少及便秘或腹瀉。與對(duì)照組比較，MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠進(jìn)食量減少、皮膚變淺、皮下脂肪減少?；熤衅冢琈TD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠進(jìn)食量均低于對(duì)照組(P=0.001，P=0.000)，LDM-DDP組裸鼠進(jìn)食量與MTD-DDP組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.657)。化療結(jié)束，MTD-DDP組、LDM

9、-DDP組裸鼠進(jìn)食量均低于對(duì)照組（P=0.000，P=0.000），LDM-DDP組與MTD-DDP組裸鼠進(jìn)食量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.834)。
　　2.2裸鼠化療副反應(yīng)評(píng)估
　　自化療第1日至18日，MTD-DDP組和LDM-DDP組裸鼠體重都出現(xiàn)了不同程度下降?；熤衅冢琈TD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠體重均低于對(duì)照組(P=0.023，P=0.002)，而LDM-DDP組裸鼠體重與MTD-DDP組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差

10、異(P=0.322)?；熃Y(jié)束，MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠體重均低于對(duì)照組(P=0.015，P=0.002)，LDM-DDP組與MTD-DDP組比較裸鼠體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.399)。
　　自化療第1日至18日，MTD-DDP組裸鼠白細(xì)胞呈現(xiàn)持續(xù)下降趨勢(shì)?；?日，對(duì)照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組裸鼠白細(xì)胞差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.930，F(xiàn)=0.073）?；?2日，MTD-DDP組裸鼠白細(xì)胞顯著低

11、于對(duì)照組(P=0.006)，而LDM-DDP組裸鼠白細(xì)胞與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.192);化療18天，與對(duì)照組及LDM-DDP組比較，MTD-DDP組裸鼠白細(xì)胞顯著降低(P=0.010，P=0.029)。
　　化療中期及化療結(jié)束，三組裸鼠內(nèi)臟均未見微小轉(zhuǎn)移病灶。化療中期MTD-DDP組有1只裸鼠出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪樣變性，化療結(jié)束有2只出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪樣變性，而對(duì)照組和LDM-DDP組裸鼠內(nèi)臟未見明顯異常。
　　3移植

12、瘤組織中增殖細(xì)胞核抗原Ki-67的蛋白表達(dá)
　　化療中期，MTD-DDP組、LDM-DDP組均可以抑制腫瘤細(xì)胞增殖，其Ki-67蛋白表達(dá)均顯著低于對(duì)照組(P=0.004，P=0.000)，但LDM-DDP組Ki-67蛋白表達(dá)水平與MTD-DDP組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.080)。
　　化療結(jié)束，LDM-DDP組可顯著抑制腫瘤細(xì)胞增殖，其Ki-67蛋白表達(dá)顯著低于對(duì)照組(P=0.003)。MTD-DDP組Ki-67蛋白表

13、達(dá)與對(duì)照組及LDM-DDP組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.126，P=0.079)。
　　4移植瘤組織中腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物CD133的蛋白表達(dá)
　　化療中期，對(duì)照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組CD133蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.190，F(xiàn)=1.858)。
　　化療結(jié)束，MTD-DDP組、LDM-DDP組CD133蛋白表達(dá)均顯著高于對(duì)照組（P=0.000，P=0.037），而LDM-DDP組CD133表達(dá)顯

14、著低于MTD-DDP組(P=0.011)。
　　5移植瘤組織中耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)
　　5.1 BCRP蛋白表達(dá)
　　化療中期，MTD-DDP組、LDM-DDP組BCRP蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組(P=0.000，P=0.001)，但LDM-DDP組BCRP蛋白表達(dá)水平與MTD-DDP組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.098）。
　　化療結(jié)束，MTD-DDP組、LDM-DDP組BCRP蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組(P=0.000，

15、P=0.004);而LDM-DDP組BCRP蛋白表達(dá)水平顯著低于MTD-DDP組(P=0.001)。與化療中期比較，化療結(jié)束時(shí)對(duì)照組、MTD-DDP組、LDM-DDP組BCRP蛋白表達(dá)均增加(P=0.014，P=0.000，P=0.011)。
　　5.2 LRP蛋白表達(dá)
　　化療中期，MTD-DDP組、LDM-DDP組LRP蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組(P=0.000，P=0.000)，LDM-DDP組LRP蛋白表達(dá)與MTD-DDP

16、組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.060)。
　　化療結(jié)束，MTD-DDP組、LDM-DDP組LRP蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組(P=0.000，P=0.003)，LDM-DDP組LRP蛋白表達(dá)與MTD-DDP組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.274)。
　　5.3 P-gp蛋白表達(dá)
　　化療中期，MTD-DDP組、LDM-DDP組P-gp蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組(P=0.000，P=0.006)，LDM-DDP組P-gp蛋白表達(dá)與MTD

17、-DDP組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.075)。
　　化療結(jié)束，MTD-DDP組、LDM-DDP組P-gp蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組(P=0.002，P=0.038)，LDM-DDP組P-gp蛋白表達(dá)與MTD-DDP組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.171)。
　　結(jié)論:
　　1在累計(jì)藥物劑量相同的情況下，與MTD模式比較，LDM模式抑制荷人卵巢癌SKOV3細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)的效果更好，而骨髓抑制更輕。
　　2在L