Notch1對神經膠質瘤細胞“干性”及多藥耐藥性的調節(jié).pdf

1、目的：
　　1.研究Notch1基因與人神經膠質瘤U251細胞“干性”的關系。
　　2.探討人膠質瘤中Notch1信號與多藥耐藥之間的關系。
　　方法：
　　1.通過慢病毒包裝、轉染、篩選，分別獲得高表達NICD的U251細胞株和Notch1基因敲低的U251細胞株，并通過Western Blotting及免疫熒光染色進行鑒定。
　　2.流式細胞術檢測和比較NICD高表達和Notch1基因敲低的U251細胞

2、中CD133+細胞的比例。
　　3.免疫熒光染色檢測NICD高表達和Notch1基因敲低的U251細胞的Nestin、GFAP的表達情況。
　　4.腫瘤細胞球培養(yǎng)，計算和比較NICD高表達和Notch1基因敲低的U251細胞球形成率。
　　5.SCID小鼠致瘤實驗，檢測NICD高表達的U251細胞的成瘤能力。
　　6.MTT法檢測上述各組細胞經化療藥物BCNU、VM-26處理后細胞生存率的變化。
　　7.R

3、hodamine123檢測各組細胞藥物外排功能。
　　結果：
　　1.成功建立了高表達NICD和Notch1基因敲低的U251細胞株。
　　2.流式細胞術結果顯示NICD高表達的U251細胞中CD133+細胞率與對照組相比明顯增高，Notch1基因敲低的U251細胞中CD133+細胞率與對照組相比降低。
　　3.免疫熒光染色結果顯示，NICD高表達組細胞的Nestin熒光強度明顯強于其對照組，GFAP熒光強度明顯

4、低于其對照組；而Notch1基因敲低組細胞的Nestin熒光強度明顯弱于其對照組，GFAP則明顯強于其對照組。
　　4.腫瘤干細胞培養(yǎng)結果顯示NICD高表達組細胞球形成率高于對照組，Notch1基因敲低組細胞球形成率低于其對照組。
　　5.SCID小鼠致瘤實驗結果顯示，NICD高表達組細胞的致瘤能力明顯強于對照組細胞。
　　6.MTT實驗結果顯示，在化療藥物 VM-26（1.5μM）或 BCNU（150μM）作用下，N