中國(guó)聽(tīng)神經(jīng)病譜系障礙患者PJVK與OTOF基因臨床遺傳特征分析.pdf

1、聽(tīng)神經(jīng)病(auditory neuropathy，AN)又稱(chēng)為聽(tīng)神經(jīng)病譜系障礙(auditoryneuropathy spectrum disorder，ANSD)，描述了一種內(nèi)毛細(xì)胞和聽(tīng)神經(jīng)突觸和/或聽(tīng)神經(jīng)本身功能不良所致的聽(tīng)力障礙，不同于典型的感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失。典型的臨床表現(xiàn)是言語(yǔ)理解力受損，而言語(yǔ)覺(jué)察閾和純音聽(tīng)閾可以正常，也可以嚴(yán)重受損；聽(tīng)力學(xué)檢查特點(diǎn)是耳聲發(fā)射(otoacoustic emissions，OAE)和耳蝸微音電位

2、(cochlear microphonics，CM)正常引出，聽(tīng)性腦干反應(yīng)(ABR)無(wú)明顯分化的波形或嚴(yán)重異常。
　　目前聽(tīng)神經(jīng)病的病因、病變部位和發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，導(dǎo)致臨床干預(yù)的預(yù)測(cè)和評(píng)估上存在難度。2008年，Starr等提議按病損部位對(duì)AN分型：如只是聽(tīng)神經(jīng)受累，內(nèi)毛細(xì)胞和突觸正常，稱(chēng)為“聽(tīng)神經(jīng)病變”(auditory nervedisorder)，如果內(nèi)毛細(xì)胞突觸病變而聽(tīng)神經(jīng)正常，稱(chēng)為“聽(tīng)突觸病變”(auditorys

3、ynaptic disorder)。按病變部位分類(lèi)，有助于精確定義本病，為臨床干預(yù)提供指導(dǎo)。然而，目前尚無(wú)臨床測(cè)試方法可以精確地確定病變部位。近年來(lái)，一系列聽(tīng)神經(jīng)病相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn)，從分子水平揭示了聽(tīng)神經(jīng)病的病理機(jī)制，使得根據(jù)基因?qū)е碌牟煌∽儾课粚?duì)聽(tīng)神經(jīng)病進(jìn)行分型成為可能，在非綜合征型聾病例中尤為重要。目前研究發(fā)現(xiàn)與常染色體隱性遺傳非綜合征性聽(tīng)神經(jīng)病相關(guān)的基因有PJVK基因和OTOF基因。
　　本研究應(yīng)用候選基因突變篩查方法，選取

4、2003-2011年收集和保存的明確診斷的150例聽(tīng)神經(jīng)病患者，開(kāi)展中國(guó)聽(tīng)神經(jīng)病人群PJVK基因的突變特征研究，并在本課題組前期完成76例聽(tīng)神經(jīng)病患者OTOF基因篩查的基礎(chǔ)上進(jìn)一步針對(duì)17例聽(tīng)神經(jīng)病患者開(kāi)展OTOF基因篩查，進(jìn)而結(jié)合臨床表型與基因型探討溫度敏感性聽(tīng)神經(jīng)病患者的臨床遺傳學(xué)特征。從遺傳學(xué)角度闡述聽(tīng)神經(jīng)病的病因?qū)W機(jī)制及其病變部位，探討不同類(lèi)型聽(tīng)神經(jīng)病患者的臨床特點(diǎn)和遺傳學(xué)特征。
　　本研究共分三個(gè)部分：
　　第一部

5、分中國(guó)聽(tīng)神經(jīng)病譜系障礙患者PJVK基因臨床遺傳學(xué)特征分析選取2003年-2011年確診的聽(tīng)神經(jīng)病患者150例(分別來(lái)自北京、天津、河北、河南、山東、山西等20個(gè)省市，男女比例為1:1.05)，針對(duì)PJVK基因的7個(gè)外顯子設(shè)計(jì)引物，采取聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增目的片段，應(yīng)用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法進(jìn)行PJVK基因突變檢測(cè)；并針對(duì)發(fā)現(xiàn)的突變位點(diǎn)，在100名聽(tīng)力正常人中進(jìn)行驗(yàn)證。分析中國(guó)聽(tīng)神經(jīng)病患者該基因的遺傳特征及相關(guān)聽(tīng)神經(jīng)病的臨床特點(diǎn)。<

6、br>　　研究發(fā)現(xiàn)：在150例聽(tīng)神經(jīng)病患者中共檢測(cè)到PJVK基因位于外顯子區(qū)域的突變5種，4種為國(guó)際上未見(jiàn)報(bào)道的突變：1種為無(wú)義突變c.886C>T，3種為錯(cuò)義突變c.437G>A，c.740G>T和c.887G>A；還發(fā)現(xiàn)1種已報(bào)道的致病突變c.548G>A。在150例聽(tīng)神經(jīng)病患者中PJVK基因突變攜帶率為3.3％。
　　攜帶c.886C>T突變的患者臨床表現(xiàn)為溫度敏感性聽(tīng)神經(jīng)病，該突變使第296位氨基酸位點(diǎn)處形成終止密碼子，導(dǎo)

7、致編碼的蛋白質(zhì)提前終止，在150例病人中僅1例攜帶該突變(0.67％)，99例正常人中均未發(fā)現(xiàn)該突變，提示此為致聾突變。c.437G>A，c.740G>T，c.548G>A和c.887G>A均引起氨基酸的改變，突變氨基酸位點(diǎn)在不同物種間高度保守，且在正常對(duì)照者中未檢測(cè)到這些突變，考慮與聽(tīng)神經(jīng)病的發(fā)病密切相關(guān)。攜帶c.437G>A突變患者23歲發(fā)病，聽(tīng)力曲線為覆盆形，低頻中度、中重度聽(tīng)力損失，中頻聽(tīng)力正常，高頻輕度聽(tīng)力損失，言語(yǔ)識(shí)別率左耳

8、68%，右耳64%；攜帶c.548G>A突變患者21歲發(fā)病，聽(tīng)力曲線為低頻上升型，低頻中度、中重度聽(tīng)力損失，高頻聽(tīng)力正常，言語(yǔ)識(shí)別率左耳32%，右耳18％；攜帶c.740G>T突變患者16歲發(fā)病，波動(dòng)性聽(tīng)力損失，聽(tīng)力損失在中度到輕度之間，言語(yǔ)識(shí)別率左耳88%，右耳86%；攜帶c.887G>A突變的患者表現(xiàn)為嬰幼兒時(shí)期發(fā)病，聽(tīng)力曲線為中頻“U”型，高、低頻為輕度聽(tīng)力損失，中頻為中重度聽(tīng)力損失，言語(yǔ)識(shí)別率左耳80％，右耳76％。
　　

9、第二部分中國(guó)聽(tīng)神經(jīng)病譜系障礙患者OTOF基因臨床遺傳學(xué)特征分析本研究在本課題組前期完成76例聽(tīng)神經(jīng)病患者OTOF基因篩查的基礎(chǔ)上進(jìn)一步針對(duì)17例聽(tīng)神經(jīng)病患者開(kāi)展OTOF基因篩查。收集患者臨床聽(tīng)力學(xué)資料，針對(duì)OTOF基因的47個(gè)外顯子設(shè)計(jì)44對(duì)引物，采取聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，應(yīng)用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法進(jìn)行OTOF基因突變檢測(cè)；針對(duì)發(fā)現(xiàn)的突變位點(diǎn)，在100名聽(tīng)力正常人中進(jìn)行驗(yàn)證。以了解這些聽(tīng)神經(jīng)病患者OTOF基因的遺傳學(xué)特征及臨床特點(diǎn)

10、。
　　研究發(fā)現(xiàn)：本研究共檢測(cè)到OTOF基因位于外顯子區(qū)域的變異29種，其中可能的致病突變有11種，多態(tài)性改變有18種。在可能致病的11種突變中，有8種是本研究發(fā)現(xiàn)的新的突變，包括4種移碼突變(p.G558A fsX21，p.L795SfsX5，p.11108H fsX69，c.5833delG)，1種無(wú)義突變(p.Y1133X)，和3種錯(cuò)義突變(P.Q265L，p.G541S和p.R1928C)；此外本研究還發(fā)現(xiàn)了三種已報(bào)道的致

11、病突變(p.N727S，p.Q994V fsX6，C.ivs4023+1G>A)。這11種可能的致病突變，目前僅在中國(guó)人群中發(fā)現(xiàn)，未見(jiàn)其他地域人群中相關(guān)報(bào)道。
　　本研究在1名溫度敏感性聽(tīng)神經(jīng)病患者中檢測(cè)到p.G541S和p.L795SfsX5復(fù)合雜合突變，在其他聽(tīng)神經(jīng)病患者及正常人中均未發(fā)現(xiàn)該突變，這是與溫度敏感性聽(tīng)神經(jīng)病相關(guān)的新的突變。在3名嬰幼兒聽(tīng)神經(jīng)病患兒中檢測(cè)到其中1人攜帶OTOF基因p.G558A fsX21雜合突變、

12、p.Q994V fsX6雜合突變和p.Q265L雜合突變；另1名患兒攜帶OTOF基因c.4023+1G>A純合突變；其余1名患兒攜帶OTOF基因c.5833delG和p.Y1133X復(fù)合雜合突變；三名患兒都表現(xiàn)為嬰幼兒時(shí)期發(fā)病，雙耳對(duì)稱(chēng)的極重度聾。此外，本研究還在3例聽(tīng)神經(jīng)病患者中還檢測(cè)到3種單雜合突變：攜帶p.I1108H fsX69突變患者表現(xiàn)為雙耳對(duì)稱(chēng)的重度耳聾，平坦型聽(tīng)力曲線；攜帶p.N727S突變患者表現(xiàn)為雙耳中重度聾，平坦型

13、聽(tīng)力曲線；攜帶p.R1928C突變的患者表現(xiàn)為雙耳極重度聾。
　　第三部分溫度敏感性聽(tīng)神經(jīng)病譜系障礙患者臨床遺傳學(xué)特征分析本研究針對(duì)3名溫度敏感性聽(tīng)神經(jīng)病患者開(kāi)展聽(tīng)神經(jīng)病相關(guān)基因OTOF和PJVK檢測(cè)，并回顧分析其臨床特征。
　　研究發(fā)現(xiàn)：在3名溫度敏感性聽(tīng)神經(jīng)病患者中，1名患者攜帶OTOF基因p.G541S和p.L795S fsX5復(fù)合雜合突變，1名患者攜帶OTOF基因p.Q994V fsX6雜合突變和PJVK基因p.R2

14、96X雜合突變，1名患者未檢測(cè)到PJVk基因或OTOF基因致病突變。
　　攜帶OTOF基因p.Q994V fsx6雜合突變和PJVK基因p.R296X雜合突變的患者聽(tīng)力狀況在一天之內(nèi)隨不同時(shí)間體溫的變化而有所變化，聽(tīng)力好時(shí)對(duì)日常談話的聲音有反應(yīng)，能夠執(zhí)行指令性動(dòng)作，可以交流并正確回答問(wèn)題；聽(tīng)力不好時(shí)對(duì)大的聲音沒(méi)有反應(yīng)，不能完成指令性動(dòng)作，對(duì)周?chē)挛锬?。攜帶OTOF基因p.G541S和p.L795S fsX5復(fù)合雜合突變患兒主訴為