人體尿液中黃蝶呤與異黃蝶呤的分析方法的研究及其應(yīng)用.pdf

1、癌癥是威脅人類生命的重大疾病之一,尋找疾病早期診斷方法是提高其治愈率的有效手段之一。蝶呤類化合物(包括黃蝶呤、異黃蝶呤、蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤、蝶呤-6-羧酸)屬于蝶啶的衍生物,分布于整個(gè)生物界,在細(xì)胞代謝過程中起著重要的輔助作用,其含量水平的變化在臨床診斷上具有重要的價(jià)值。在蝶呤類化合物中,以新蝶呤研究較為深入,并已應(yīng)用于臨床上包括癌癥在內(nèi)的多種疾病的診斷,而其它蝶呤類化合物相對(duì)研究較少。
　　 本論文應(yīng)用色譜分析技術(shù),研究建

2、立了人體尿液中黃蝶呤、異黃蝶呤三種分析新方法,并選擇其中一種方法應(yīng)用于大量健康人及癌癥病人尿樣分析,通過T檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn),和健康人相比,癌癥病人尿液中黃蝶呤和異黃蝶呤水平存在顯著性差異。同時(shí)采用三維熒光光譜技術(shù)獲得了不同人群尿液的指紋圖譜,結(jié)合主成分分析的投影判別法和聚類分析法對(duì)尿樣三維熒光譜的特征參數(shù)進(jìn)行了模式識(shí)別研究。本文主要研究結(jié)果如下:
　　 1.建立了高效液相色譜.熒光分析同時(shí)測定人體尿液中的黃蝶呤與異黃蝶呤的分析新方法。以

3、磷酸鹽緩沖溶液(PH=7.5)-甲醇(98:2,v:v)為流動(dòng)相,流速為1.0 mL/min,熒光檢測波長λex=345 nm,λem=420 nm。黃蝶呤含量在0.0013μg/mL～0.945μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系,線性回歸方程為y=3.0×106x+28959,相關(guān)系數(shù)為0.9999,檢測限為0.5 ng/mL；異黃蝶呤含量在0.00017μg/mL～0.118μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系,線

4、性回歸方程為y=1.0×108x-162133,相關(guān)系數(shù)為0.9996,檢測限為0.05 ng/mL。平均加標(biāo)回收率分別在83.9％～106.0％之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于7.9％。尿液前處理方法簡單,易操作。該方法用于人體尿液中黃蝶呤與異黃蝶呤的分析,結(jié)果良好。
　　 2.建立了高效液相色譜.電噴霧質(zhì)譜(HPLC-ESI-MS)同時(shí)測定人體尿液中黃蝶呤與異黃蝶呤的分析方法。尿樣經(jīng)離心、過膜后直接進(jìn)樣,采用電噴霧質(zhì)譜定性及定量。結(jié)果

5、表明,黃蝶呤與異黃蝶呤濃度分別在0.0204μg/mL～2.04μg/mL及0.0202μg/mL～2.02μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系,線性回歸方程分別為y=342622x-7848(r2=0.9995)及y=309694x-3573(r2=0.9997),檢測限分別為0.007μg/mL和0.006μg/mL。黃蝶呤與異黃蝶呤加標(biāo)平均回收在88.0％～110.0％之間。該方法前處理方法簡單,易操作,應(yīng)用于實(shí)際尿樣分析

6、,結(jié)果良好。
　　 3.建立了高效陰離子交換色譜-積分脈沖安培測定人體尿液中異黃蝶呤的分析方法。尿液經(jīng)ENVI-18與732型陽離子交換柱串聯(lián)萃取后,除去了大量干擾物質(zhì)。采用IonPac AS21分析柱(2 mm×250 mm),以0.020 mol/L NaOH溶液為淋洗液,流速為0.40 mL/min,在優(yōu)化的安培檢測波形條件下,異黃蝶呤在0.005μg/mL～0.200μg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)

7、為0.9984,檢出限為0.003μg/mL。健康人及癌癥病人尿液在2.00μg/mL和5.00μg/mL兩個(gè)添加水平的平均回收率在95.4％～96.8％之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5％。此方法環(huán)保、快速、準(zhǔn)確,可用于健康人與癌癥病人尿液中異黃蝶呤的測定。
　　 4.運(yùn)用高效液相色譜-熒光分析法對(duì)34個(gè)健康人,29個(gè)胃癌病人及14個(gè)其它癌癥病人的尿樣中黃蝶呤與異黃蝶呤進(jìn)行測定,通過T檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn),與健康人相比,胃癌及其它癌癥病人尿樣中黃蝶