先天性巨結腸術中NADPH-d法快速冰凍病理診斷的研究.pdf

1、目的
　　先天性巨結腸(Hirschsprung'sdiseaseHD)又稱腸無神經(jīng)節(jié)細胞癥(Aganglionosis)，該病是小兒消化道畸形的常見病。HD的病理改變是病變腸壁內粘膜下層及肌層內缺乏神經(jīng)叢或神經(jīng)節(jié)細胞導致病變腸段無法松弛和失去正常蠕動，使病變腸段始終處于痙攣狀態(tài)，不能正常地將病變近端腸內容排入病變腸段中，臨床上表現(xiàn)為腹脹、頑固性便秘，嚴重影響生長發(fā)育。
　　手術切除HD病變腸管是根治該病的方法，其術后效果主

2、要決定病變腸管的徹底切除，因此術中正確的病變腸管判定至關重要，傳統(tǒng)術中診斷方法為冰凍切片行HE染色，這種方法其時間大約在30分鐘左右，而且這種方法對神經(jīng)節(jié)細胞的辨認需要有資深經(jīng)驗的病理醫(yī)生來診斷，一些病例因此術中需做多次冰凍切片才能做出病理診斷，耗時更長，而且冰凍HE染色與石蠟HE染色不能達到100％的符合。有些病例因此導致切除不充分而需二次或多次手術。給患兒造成巨大損害，也容易導致醫(yī)療糾紛。NADPH-d冰凍切片染色法是一種較快的神經(jīng)

3、節(jié)細胞染色法，對神經(jīng)節(jié)細胞有特異呈色，神經(jīng)節(jié)細胞的顯染后易于辨認。本研究利用NADPH-d冰凍切片染色法應用于巨結腸的術中冰凍切片染色行術中快速病理診斷并于傳統(tǒng)冰凍HE染色進行比較研究，分析NADPH-d冰凍切片染色法在巨結腸術中快速病理診斷的作用和特點，為尋找更加快速及準確的巨結腸術中診斷方法提供新的途徑。
　　方法
　　一、標本與分組
　　60例經(jīng)石蠟切片HE染色病理確診的先天性巨結腸患兒的術中切除腸管包括痙攣段、

4、正常段腸管（來源于中國醫(yī)科大學盛京醫(yī)院新生兒外科，并獲得醫(yī)院倫理委員會認可[no.2012PS80K]），全部標本術中均行冰凍HE染色，應用盲法將標本行NADPH-d冰凍切片染色。
　　二、實驗試劑
　　0.1mol/LPB(pH=8.0);NADPH-d(Simga);
　　NBT(Simga);二甲基亞砜;
　　Triton(X)-100
　　三、實驗方法
　　患兒術后石蠟切片HE染色病理檢查診斷

5、為最終診斷標準，分別用NADPH-d快速染色法與傳統(tǒng)冰凍切片HE快速染色法進行比較研究，統(tǒng)計診斷時間，診斷率，分析前者的特點，兩種不同處理組間比較采用配對x2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義，再隨機取NADPH-d染色片子（正常段）進行HE染色（雙重染色）。
　　結果
　　本組60例病例中NADPH-d染色正常腸段陽性57例，陰性3例，全部痙攣腸段無陽性結果;冰凍HE染色下常腸管全部為陽性結果，痙攣段腸管全部為陰性結果

6、。經(jīng)統(tǒng)計學分析，兩種方法陽性率差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。經(jīng)計算NADPH-d染色染色時間為15分鐘，明顯小于冰凍HE染色時間（30分鐘），經(jīng)統(tǒng)計學分析，有統(tǒng)計學意義。神經(jīng)節(jié)細胞在NADPH-d冰凍切片呈紫色胞漿，核呈空泡狀容易確認。
　　結論
　　1、快速冰凍NADPH-d染色法可應用于巨結腸術中快速病理診斷，結果可靠。
　　2、冰凍NADPH-d染色法可用于巨結腸術中判定正常腸管的界定且可信。
　　3、