腸粘膜迷走傳入神經ECB-CB1通路參與調控內臟高敏感的機制研究.pdf

1、背景：
　　內臟高敏感反應是腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）癥狀產生的核心機制。其神經胃腸病學紊亂機制尚不明確。我們的前期研究發(fā)現迷走傳入神經5-HT3受體途徑參與抑制性調控內臟敏感反應。然而，腸粘膜處5-HT的受體系統(tǒng)復雜，限制了5-HT相關藥物的臨床應用前景，尋找迷走傳入神經5-HT3受體途徑中可調控的其他分子靶標十分必要。ECB/CB1系統(tǒng)在腸粘膜有廣泛分布。但其是否參與和如何參與迷走

2、傳入神經調控內臟痛反應的機制尚不明確。
　　目的：
　　闡明腸粘膜處ECB/CB1系統(tǒng)參與迷走傳入神經對內臟痛反應的抑制性調控機制；闡明ECB/CB1是5-HT3受體下游的可調控的關鍵分子機制。
　　方法：
　　第一部分：采用成年 SD雄性大鼠（體重200-250g）隨機對照研究（實驗組n=5；對照組n=5）在不同神經藥理學處理條件下（ECB/CB1系統(tǒng)受體作用藥物）以及迷走傳入神經處理條件下（物理切斷以及藥物阻

3、斷）傷害性結直腸擴張（colorectal distension，CRD20mmHg、40mmHg和60mmHg）所引起大鼠20s內內臟痛反應（visceromotor response，VMR）的變化，以證實腸粘膜處ECB/CB1系統(tǒng)經由迷走傳入通路發(fā)揮抑制性調控內臟痛反應。
　　第二部分：采用成年 SD雄性大鼠（體重200-250g）隨機對照研究（實驗組n=5；對照組n=5）在不同神經藥理學處理條件下（5-HT3受體作用藥物，

4、以及ECB/CB1系統(tǒng)受體作用藥物），CRD（20mmHg、40mmHg和60mmHg）引發(fā)大鼠20s內VMR的變化；以證實腸粘膜處ECB/CB1系統(tǒng)是迷走傳入5-HT3通路中發(fā)揮抑制性調控內臟痛反應的關鍵可調控分子機制。
　　第三部分：采用慢性灌注5-HT及給予結腸擴張刺激方法，建立 SD雄性大鼠結直腸擴張內臟痛高敏感反應模型，隨機對照研究（實驗組n=5；對照組n=5）在不同ECB/CB1系統(tǒng)受體干預藥物作用下，CRD（20mm

5、Hg、40mmHg和60mmHg）引發(fā)大鼠20s內VMR的變化。以證實在模擬臨床結直腸內臟高敏感的動物模型上，腸粘膜處ECB/CB1系統(tǒng)是干預內臟高敏感狀態(tài)的可調控分子機制。
　　結果：
　　第一部分：腔內灌注CB1受體激動劑ACEA后CRD引起的VMR顯著降低（CRD60mmHg：saline in6.38±0.39，ACEA in4.99±0.37）[F(1,24)=22.08,P<0.01]。切除迷走神經后灌注 ACE

6、A，VMR與生理鹽水組相比無明顯變化[F(1,24)=0.3158,P>0.05]，而假手術組灌注ACEA，VMR較生理鹽水組顯著降低[F(1,24)=15.21,P<0.01]。利多卡因處理后灌注ACEA，VMR與生理鹽水組相比無明顯變化[F(1,24)=0.2122,P>0.05]，對應的假手術組灌注ACEA后VMR顯著降低[F(1,24)=20.04，P<0.01]。辣椒素處理后灌注ACEA，VMR與生理鹽水組相比也不再降低[F(

7、1,24)=0.6030,P>0.05]，對應的假手術組灌注ACEA后VMR顯著降低[F(1,24)=24.01，P<0.01]。
　　第二部分：CB1受體拮抗劑預處理會抵消5-HT的作用（CRD60mmHg：saline+5-HT in5.0±0.35，AM251+5-HT in7.24±0.6），與對照組相比VMR顯著增高[F(1,24)=38.66,P<0.01]。急性灌注5-HT后，VMR較對照組下降顯著[F(1,24)=

8、29.75,P<0.01]，局部 AEA含量為198.14ng/g±20.071，與對照組（114.42ng/g±11.983）相比，急性灌注5-HT組AEA含量顯著升高（P=0.0026，P<0.01）。腔內使用5-HT3受體拮抗劑格拉司瓊后再灌注5-HT，與基線相比VMR不再降低[F(1,24)=1.004，P>0.05]，與生理鹽水后灌注5-HT組相比VMR明顯增高[F(1,24)=45.56,P<0.01]；格拉司瓊預處理后再灌

9、注5-HT，局部AEA含量為120.2ng/g±3.367。與生理鹽水預處理后灌注5-HT組（222.4ng/g±24.887）相比，AEA含量顯著下降（P=0.019，P<0.05）。腔內灌注5-HT3受體激動劑SR57227A模擬了5-HT的作用（CRD60mmHg：saline in6.3±0.39，SR57227A in4.7±0.37），VMR下降顯著[F(1,24)=28.73,P<0.01]，灌注 SR后 AEA含量為20

10、2.4ng/g±11.682，與對照組（120.42ng/g±13.279）相比，急性灌注SR引起AEA含量顯著升高（P=0.0003，P<0.01）。格拉司瓊預處理后腔內灌注ACEA，VMR與生理鹽水處理后灌注ACEA組相比無明顯變化[F(1,24)=0.6068,P>0.05]，AM251預處理后灌注SR，VMR與生理鹽水處理后灌注SR組相比明顯增高[F(1,24)=32.13,P<0.01]。切除迷走神經（或藥物阻斷）后再灌注5-

11、HT，VMR不再降低，AEA含量也不再升高。連續(xù)十二指腸腔內灌注5-HT（10nmol）5天，出現時間依賴性的對CRD引發(fā)的VMR強度的時間依賴性改變：從第3天起，VMR增加，與對照組相比VMR顯著增高[F(1,40)=5.248，P<0.05]。而AEA含量則呈現時間依賴性下降，d1 saline：100.4ng/g±10.6,5-HT in：181.3ng/g±15.3； d5 saline：106.05ng/g±9.95,5-HT

12、 in：62.5ng/g±8.98，與對照組相比顯著下降[F(1,40)=11.94，P<0.05]。
　　第三部分：建立內臟高敏感模型，發(fā)現加用CB1受體激動劑WIN或ACEA可有效防止高敏感形成，與相應的對照組相比（WIN組：[F(1,40)=20.79,P<0.01]，ACEA組：（[F(1,40)=34.76,P<0.01]），差異具有明顯統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　腸粘膜處ECB/CB1受體參與迷走神經抑制