法夫酵母新科斯糖的鑒定及相應(yīng)產(chǎn)糖酶的研究.pdf

1、本論文以法夫酵母(Xanthophyllomycesdendrorhous)為出發(fā)菌株，以本研究室發(fā)明專利的生產(chǎn)技術(shù)，發(fā)酵生產(chǎn)低聚糖，對(duì)該低聚糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，并對(duì)發(fā)酵過(guò)程中的酶初步分離，研究其性質(zhì)。 測(cè)定發(fā)酵液的酶活，其具有一定的糖苷酶活力。對(duì)發(fā)酵液中糖類物質(zhì)高效液相色譜分析表明，發(fā)酵液中可能存在新科斯糖。以蔗糖為底物，發(fā)酵液為酶源進(jìn)行酶解反應(yīng)(溫度18℃，pH6.5)，酶解產(chǎn)物的高效液相色譜分析表明其中蔗糖含量降低，新科斯糖

2、的含量增加，并同時(shí)伴隨有葡萄糖和果糖的產(chǎn)生，初步說(shuō)明發(fā)酵液中的產(chǎn)糖酶具有果糖基轉(zhuǎn)移作用。 采用高效液相NH2制備柱對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行純化制備，收集其中的一種主要的低聚糖，對(duì)其進(jìn)行質(zhì)譜和13C核磁共振分析，解析兩譜圖表明，該低聚糖的分子量為504Da，其結(jié)構(gòu)為.β-D-呋喃果糖(2→6)-a-D-吡喃葡萄糖(2→1)-β-D-呋喃果糖，即為新科斯糖。 采用硫酸銨沉淀，AKTA蛋白純化層析系統(tǒng)(DEAESpheroseFF層析柱

3、)層析對(duì)發(fā)酵液中的酶進(jìn)行初步分離，研究酶學(xué)性質(zhì)。結(jié)果表明，該酶分子量約為70542Da，酶解反應(yīng)的最適溫度范圍為18~30℃，且該溫度范圍內(nèi)酶活穩(wěn)定，隨著溫度的升高，酶活力迅速下降，60℃完全失活。其最適pH為6.5，pH5-6.5范圍內(nèi)，酶活力穩(wěn)定。研究了部分化學(xué)物質(zhì)對(duì)酶活力的影響，其中K+(2mmol/L)對(duì)酶活力幾乎沒(méi)有影響，甚至具有激活作用；ca2+和Mg2+(2mmol/L)對(duì)酶活力影響不大，zn2+和.Al3+(2mmol/