DNMT3B與肝癌發(fā)生相關性的研究.pdf

1、目的：探討DNMT3B與肝癌發(fā)生發(fā)展的關系,為肝癌的早期診斷和臨床治療提供實驗基礎。 方法：用免疫組織化學技術(ABC法)分析DNMT3B在肝癌病例組織石蠟切片中的表達。用脂質體將構建好的DNMT3B siRNA重組質粒載體及其對照質粒載體分別轉染到肝癌癌旁細胞系QSG-7701中,通過G418篩選獲得穩(wěn)定轉染的細胞系,并用Real-timeFluorescent Quantitative RT-PCR及Western Blot

2、ting方法檢測DNMT3B沉默效率。通過CellCounting Kit-8檢測DNMT3B表達抑制后肝癌細胞系及癌旁細胞系增殖能力的變化。用流式細胞儀技術分析DNMT3B表達抑制后的肝癌癌旁細胞系的細胞周期的改變情況。用Hoechst33342檢測DNMT3B表達抑制后的肝癌細胞系及癌旁細胞系的細胞凋亡變化。通過軟瓊脂克隆形成實驗檢測DNMT3B表達抑制后的肝癌細胞系及癌旁細胞系細胞克隆形成率的變化。 結果：免疫組織化學結果

3、顯示,在75例江蘇啟東地區(qū)肝癌患者的病理組織石蠟切片中有45例(60％)樣本表現(xiàn)為DNMT3B在癌巢中的表達水平明顯低于其在癌旁組織的表達。DNMT3BsiRNA.重組載體有效地抑制了肝癌癌旁細胞系QSG-7701中DNMT3B的表達。細胞增殖實驗結果顯示轉染了DNMT3B siRNA重組載體的肝癌細胞系SMMC-7721及癌旁細胞系QSG-7701的細胞增殖能力低于轉染了對照質粒載體的細胞系。細胞周期檢測結果顯示,細胞系QSG-770

4、1-pMT3B中G1期細胞比例增加,G2期、S期細胞減少,QSG-7701-pMT3B及對照細胞系QSG-7701-sMT3B的增殖指數(shù)分別為0.30a±0.03和0.36±0.04(P<0.01)。凋亡檢測結果顯示,與其對照細胞系相比,QSG-7701-pMT3B的細胞凋亡率增高,且在48hr時的細胞凋亡率有顯著差異(P<0.05);與其對照細胞系相比,SMMC-7721-pMT3B的細胞凋亡率增高,且在72hr時兩者的細胞凋亡率有顯

5、著差異(P<0.05)。軟瓊脂克隆形成實驗結果顯示,與其對照細胞系相比, QSG-7701-pMT3B的細胞克隆形成率降低,兩者的細胞克隆形成率有顯著差異(P<0.01);與其對照細胞系相比, SMMC-7721-pMT3B的細胞克隆形成率降低,兩者的細胞克隆形成率有顯著差異(P<0.01)。 結論：1)DNMT3B在肝癌病例組織中存在癌旁表達水平高于癌巢表達水平的異常表達模式；2)DNMT3B的異常表達可能與乙肝病毒有關；3)