DNMT3B與肝癌發(fā)生相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：探討DNMT3B與肝癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,為肝癌的早期診斷和臨床治療提供實驗基礎(chǔ)。 方法：用免疫組織化學(xué)技術(shù)(ABC法)分析DNMT3B在肝癌病例組織石蠟切片中的表達(dá)。用脂質(zhì)體將構(gòu)建好的DNMT3B siRNA重組質(zhì)粒載體及其對照質(zhì)粒載體分別轉(zhuǎn)染到肝癌癌旁細(xì)胞系QSG-7701中,通過G418篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系,并用Real-timeFluorescent Quantitative RT-PCR及Western Blot

2、ting方法檢測DNMT3B沉默效率。通過CellCounting Kit-8檢測DNMT3B表達(dá)抑制后肝癌細(xì)胞系及癌旁細(xì)胞系增殖能力的變化。用流式細(xì)胞儀技術(shù)分析DNMT3B表達(dá)抑制后的肝癌癌旁細(xì)胞系的細(xì)胞周期的改變情況。用Hoechst33342檢測DNMT3B表達(dá)抑制后的肝癌細(xì)胞系及癌旁細(xì)胞系的細(xì)胞凋亡變化。通過軟瓊脂克隆形成實驗檢測DNMT3B表達(dá)抑制后的肝癌細(xì)胞系及癌旁細(xì)胞系細(xì)胞克隆形成率的變化。 結(jié)果：免疫組織化學(xué)結(jié)果

3、顯示,在75例江蘇啟東地區(qū)肝癌患者的病理組織石蠟切片中有45例(60％)樣本表現(xiàn)為DNMT3B在癌巢中的表達(dá)水平明顯低于其在癌旁組織的表達(dá)。DNMT3BsiRNA.重組載體有效地抑制了肝癌癌旁細(xì)胞系QSG-7701中DNMT3B的表達(dá)。細(xì)胞增殖實驗結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染了DNMT3B siRNA重組載體的肝癌細(xì)胞系SMMC-7721及癌旁細(xì)胞系QSG-7701的細(xì)胞增殖能力低于轉(zhuǎn)染了對照質(zhì)粒載體的細(xì)胞系。細(xì)胞周期檢測結(jié)果顯示,細(xì)胞系QSG-770

4、1-pMT3B中G1期細(xì)胞比例增加,G2期、S期細(xì)胞減少,QSG-7701-pMT3B及對照細(xì)胞系QSG-7701-sMT3B的增殖指數(shù)分別為0.30a±0.03和0.36±0.04(P<0.01)。凋亡檢測結(jié)果顯示,與其對照細(xì)胞系相比,QSG-7701-pMT3B的細(xì)胞凋亡率增高,且在48hr時的細(xì)胞凋亡率有顯著差異(P<0.05);與其對照細(xì)胞系相比,SMMC-7721-pMT3B的細(xì)胞凋亡率增高,且在72hr時兩者的細(xì)胞凋亡率有顯

5、著差異(P<0.05)。軟瓊脂克隆形成實驗結(jié)果顯示,與其對照細(xì)胞系相比, QSG-7701-pMT3B的細(xì)胞克隆形成率降低,兩者的細(xì)胞克隆形成率有顯著差異(P<0.01);與其對照細(xì)胞系相比, SMMC-7721-pMT3B的細(xì)胞克隆形成率降低,兩者的細(xì)胞克隆形成率有顯著差異(P<0.01)。 結(jié)論：1)DNMT3B在肝癌病例組織中存在癌旁表達(dá)水平高于癌巢表達(dá)水平的異常表達(dá)模式；2)DNMT3B的異常表達(dá)可能與乙肝病毒有關(guān)；3)