遠緣鏈球菌耐氟菌株與親代菌株基因表達差異比較.pdf

1、氟化物的長期、廣泛使用可能導致耐氟菌株的產(chǎn)生，為齲病的防治提出了新的挑戰(zhàn)。為探索耐氟菌株部分致齲毒力的改變，以及其與親代菌株相比在基因表達水平上是否存在差異，本實驗選擇遠緣鏈球菌6715為研究對象，采用細菌培養(yǎng)、耐氟誘導、生理生化鑒定、抑制性消減雜交等微生物學和分子生物學方法，探討耐氟菌株的適應性耐酸能力及耐氟突變過程中，基因表達的改變。 一．遠緣鏈球菌6715耐氟菌株的體外誘導及鑒定采用逐步誘導法在體外誘導了遠緣鏈球菌6715

2、的耐氟菌株，該菌株可在高氟水平（1000微克/毫升）中生存，且在無氟培養(yǎng)基中連續(xù)傳代二十次，其耐氟特性不消失。經(jīng)形態(tài)學研究和生理生化鑒定，發(fā)現(xiàn)耐氟菌株與親代菌株具有相似的形態(tài)，且兩者均可發(fā)酵甘露醇、七葉苷、棉子糖及精氨酸，但在發(fā)酵甘露醇時，耐氟菌株出現(xiàn)遲緩發(fā)酵，反應陽性出現(xiàn)時間較親代菌株晚24小時。 二．遠緣鏈球菌6715耐氟菌株與親代菌株適應性耐酸能力的比較研究適應性耐酸被認為是影響細菌生存及致齲性的重要因素。它是指對數(shù)期生長

3、的細菌在亞致死性的低pH值環(huán)境中生長后,可抵抗致死性酸化的殺傷,產(chǎn)生適應性耐酸的能力。通過比較研究發(fā)現(xiàn)：S.6715耐氟菌株較親代具有更強的適應性耐酸能力。在預酸化pH值為5.0時，其最大生存率10.55％. 三．遠緣鏈球菌6715耐氟菌株與親代菌株基因表達差異的比較研究為了解遠緣鏈球菌6715耐氟菌株（FR-6715）與親代菌株（S.6715）基因表達的差異，本研究采用抑制性消減雜交技術得到遠緣鏈球菌6715耐氟菌株菌細胞中

4、表達顯著增強的片段，經(jīng)對比確定為結構基因fruA和SMU.438c，fruA編碼的果糖水解酶，可以利用胞外多糖中的果糖多聚體這一碳源儲庫，通過無氧酵解的方式，進行產(chǎn)酸致齲，可能是主要致齲基因之一。SMU.438c基因為一段長約200bp的核苷酸序列，其具體功能尚未明確，推斷與鏈球菌代謝機制相關。 綜合分析，本研究發(fā)現(xiàn)遠緣鏈球菌6715耐氟菌株與親代菌株相比，具有更強的致齲毒力，且在耐氟突變過程中，fruA和SMU.438c基因表