PGE-,2-通過FAK-Paxillin-Erk途徑影響肝細(xì)胞癌細(xì)胞的黏附、遷移和侵襲能力及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景： 腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移是成功治療腫瘤的最大障礙，也是目前惡性腫瘤病人的主要死因。前列腺素E2(PGE2)能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制凋亡、誘導(dǎo)免疫抑制。部分研究還表明PGE2能夠增加癌細(xì)胞與基質(zhì)的黏附，促進(jìn)黏附分子表達(dá)，激活細(xì)胞骨架系統(tǒng)，促進(jìn)腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移。對于PGE2誘使腫瘤細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的相關(guān)分子機(jī)制目前仍不十分清楚。 黏著斑激酶(focal adhesion kinase，F(xiàn)AK)是非受體蛋白酪氨酸激酶。有學(xué)

2、者研究發(fā)現(xiàn)FAK的過表達(dá)與轉(zhuǎn)移癌和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，抑制FAK的活性或阻斷其表達(dá)均能抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。關(guān)于FAK及其下游Paxillin信號通路在腫瘤細(xì)胞增殖、遷移過程中的作用，目前知之甚少。 本課題通過PGE2對肝細(xì)胞癌細(xì)胞(hepatocellular carcinoma.cells，HCC)體外作用的實(shí)驗(yàn)研究，探討了PGE2對肝細(xì)胞癌細(xì)胞黏附、遷移及侵襲的作用及其分子機(jī)制。 研究內(nèi)容： 1.觀察PGE

3、2對肝細(xì)胞癌Huh7及Hep3B細(xì)胞黏附、遷移及侵襲的影響。 2.檢測PGE2對肝細(xì)胞癌Huh7及Hep3B細(xì)胞FAK、Paxillin、Erk2及相關(guān)磷酸化蛋白表達(dá)的影響。 3.檢測EGFR信號通路特異性抑制劑AG1478對肝細(xì)胞癌Huh7細(xì)胞黏附、遷移、侵襲能力及Paxillin、Erk2的蛋白表達(dá)的影響。 4.檢測EGFR信號通路特異性抑制劑AG1478對PGE2所誘導(dǎo)的肝細(xì)胞癌Huh7細(xì)胞黏附、遷移、侵襲

4、能力的影響。 5.探討FAK/Paxillin/Erk信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在PGE2影響肝細(xì)胞癌細(xì)胞黏附、遷移、侵襲能力中可能的作用。 研究方法： 1.細(xì)胞培養(yǎng)：取人肝細(xì)胞癌細(xì)胞株Huh7及Hep3B按常規(guī)方法培養(yǎng)。 2.外源性PGE2處理后，使用WST-1法檢測腫瘤細(xì)胞黏附能力的變化；Transwell小室檢測腫瘤細(xì)胞遷移能力的變化；Transwell小室結(jié)合Matrix膠檢測腫瘤細(xì)胞侵襲能力的變化。

5、3.Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測外源性PGE2對肝細(xì)胞癌Huh7及Hep3B細(xì)胞FAK、Paxillin、Erk2及相關(guān)磷酸化蛋白表達(dá)水平的影響。 4.EGFR信號通路特異性抑制劑AG1478處理腫瘤細(xì)胞后，使用WST-1法檢測其黏附能力的變化；Transwell小室檢測遷移能力的變化； Transwell小室結(jié)合Matrix膠檢測侵襲能力的變化；Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測Paxillin及Erk2蛋白表達(dá)水平的變化。

6、 5.設(shè)對照組、PGE2組及PGE2+AG1478組，使用WST-1法檢測其黏附能力的變化；Transwell小室檢測遷移能力的變化；Transwell小室結(jié)合Matrix膠檢測侵襲能力的變化；Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測Paxillin蛋白表達(dá)水平的變化。 研究結(jié)論： 1.外源性PGE2可明顯增加肝細(xì)胞癌Huh7細(xì)胞的黏附、遷移及侵襲能力。 2.外源性PGE2可顯著促進(jìn)肝細(xì)胞癌Huh7細(xì)胞及Hep3B