蛻皮甾酮乳膏的制備方法及量效分析.pdf

1、1.背景： 傷口愈合過程，包括傷口早期止血、創(chuàng)面保護(hù)、炎癥控制及多種組織細(xì)胞的增生，肉芽組織的形成，創(chuàng)緣的爬行收縮等。而內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞等細(xì)胞的增值是形成肉芽組織的關(guān)鍵，同時(shí)也是傷口愈合的關(guān)鍵。目前用于促進(jìn)傷口愈合的外用藥主要有：(1)傷口愈合填充膏：主要有填充傷口和防止感染的作用。(2)膚康寧：能夠促進(jìn)機(jī)體在傷口部位產(chǎn)生免疫細(xì)胞，有的因子能夠“調(diào)配細(xì)胞”前往傷口處增援。(3)無推進(jìn)劑噴霧狀皮膚貼劑組合物：形成覆蓋

2、傷口的保護(hù)性薄膜，將生理活性成分或其前藥運(yùn)送至或穿透皮膚。(4)苯扎氯銨貼：主要作用為殺菌、止血、護(hù)創(chuàng)。(5)云南白藥創(chuàng)可貼及其粉劑：顯著提高血小板聚集，對(duì)抗組織腫脹，促進(jìn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bEGF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)，但其主要還是以止血消腫的早期治療為主，中后期的促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)作用相對(duì)較小[1]。以上促愈外用藥品種類有限，且主要以抗炎、止血、保護(hù)創(chuàng)面為主，但這些作用只對(duì)創(chuàng)傷早期有效。而對(duì)真正體現(xiàn)傷口愈合速度的促進(jìn)

3、各種組織細(xì)胞增值的作用較小。本研究的目的就是希望在這方面有所突破。 蛻皮甾酮(ecdyStemne，B-ecdysone，亦稱β-蛻皮激素，簡(jiǎn)稱蛻皮素)屬于昆蟲生長(zhǎng)代謝調(diào)節(jié)激素，最早為昆蟲學(xué)家所研究。昆蟲、甲殼動(dòng)物及其它節(jié)肢動(dòng)物具有韌硬的角質(zhì)層外殼，定期分泌蛻皮激素將角質(zhì)層外殼淘汰并代之以新的一層，這個(gè)過程就謂之蛻皮或蛻皮作用。但人們發(fā)現(xiàn)，蛻皮激素在植物界的分布不僅較動(dòng)物界廣，而且含量較高，資源豐富，迄今還不斷地在植物界發(fā)現(xiàn)昆蟲

4、蛻皮甾酮類物質(zhì)，這類植物源蛻皮甾酮已近160個(gè)。目前蛻皮激素的應(yīng)用仍依賴于從植物中提取。 蛻皮甾酮在脊椎動(dòng)物中也是必需的物質(zhì)，對(duì)機(jī)體功能影響較大。目前所知其作用機(jī)理主要為：1)、促進(jìn)蛋白質(zhì)合成；2)、調(diào)節(jié)糖代謝；3)、調(diào)節(jié)脂代謝；4)、調(diào)節(jié)基因表達(dá)；5)、改善免疫功能；6)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用；7)、作用于心血管系統(tǒng)；8)、促進(jìn)愈合作用等[2]。目前尚無關(guān)于蛻皮甾酮的乳膏制劑類型的研發(fā)和報(bào)道。 2.目的： 研究把蛻

5、皮甾酮單體粉劑制成使用方便、易攜易帶、經(jīng)濟(jì)節(jié)省的乳膏制劑的方法及其對(duì)實(shí)驗(yàn)性兔創(chuàng)傷模型促愈作用的量效分析，從而得出蛻皮甾酮乳膏促進(jìn)傷口愈合的最佳有效濃度。 3.方法： 3.1蛻皮甾酮乳膏的制作 取單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、白凡士、氮酮、羥苯乙酯水浴加熱至90℃，使熔融，制成油相；另取純化水、硼砂、十二烷基硫酸鈉、三乙醇胺、甘油、尿囊素水浴加熱至90"C，制成水相。將油相混合液緩緩加入水相混合液中，邊攪拌邊加入溶解于1

6、00％甲醇的某一濃度的蛻皮甾酮溶液。連續(xù)攪拌30min后，通過高剪切混合乳化機(jī)以2000-6000r/min-1的轉(zhuǎn)速攪拌下乳化成型，灌裝，即得此種濃度的蛻皮甾酮乳膏。同法制備成其他三種濃度的蛻皮甾酮乳膏。并行紫外分光光度法測(cè)定蛻皮甾酮含量以監(jiān)控乳膏質(zhì)量，使其符合《中國(guó)藥典》相關(guān)要求。 3.2蛻皮甾酮乳膏的量效分析 將11只體重相近的新西蘭兔制備成全皮層缺損的創(chuàng)傷動(dòng)物模型，每只兔5個(gè)背部創(chuàng)面，分別敷以空白乳膏基質(zhì)及四種濃

7、度的蛻皮甾酮乳膏。其中8只兔，分別于造模后4d、8d、12d，拍攝愈合后的創(chuàng)面，測(cè)量其面積，同時(shí)計(jì)算出各個(gè)創(chuàng)面的傷口愈合率，作為統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)數(shù)指標(biāo)；另外3只兔，分別于造模后4d、8d、12d取其創(chuàng)面組織行病理學(xué)觀察，作為描述性指標(biāo)。 4.結(jié)果： 4.1蛻皮甾酮乳膏的制作 根據(jù)一系列的質(zhì)量檢測(cè)，說明本乳膏制劑性狀穩(wěn)定；通過紫外分光光度法測(cè)量其蛻皮甾酮含量及回收率、精密度的結(jié)果分析說明蛻皮甾酮在乳膏制備過程中的性狀未發(fā)生

8、改變(標(biāo)準(zhǔn)品溶液和空白對(duì)照品溶液的紫外光吸收峰未發(fā)生干擾和重疊)，其含量變化在控制范圍內(nèi)未發(fā)生大的改變(通過回收實(shí)驗(yàn)及日內(nèi)、日間精密度測(cè)量已證明)。 4.2蛻皮甾酮乳膏的量效分析 傷口愈合率的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明：蛻皮甾酮乳膏有明顯的促進(jìn)傷口愈合的作用(P<0.01)，最佳有效濃度為2.5％。病理學(xué)觀察顯示：2.5％蛻皮甾酮乳膏組創(chuàng)面較其他四組肉芽組織形成明顯，上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞增生較多。 本研究通過比較空

9、白對(duì)照組(賦形劑組)及四種濃度的蛻皮甾酮乳膏組傷口的愈合率，可以看出：傷口愈合早期(4d)，各組間差異不大，此時(shí)傷口主要處于炎癥水腫期，創(chuàng)面以充血滲出為主，各種組織細(xì)胞的增值只是在起始階段，所以即使有外用藥幫助，對(duì)傷口愈合速度影響不大；而在傷口愈合中期(8d)，各種組織細(xì)胞處于快速增值階段，這時(shí)外用藥的促愈作用體現(xiàn)的比較明顯，可以看出2.5％蛻皮甾酮乳膏的傷口愈合明顯快于其他各組；而隨著愈合時(shí)間的延伸(12d)，只涂抹乳膏基質(zhì)的空白對(duì)照

10、組(賦形劑組)的劣勢(shì)越來越明顯，其傷口愈合明顯慢于其他各組，相反，2.5％蛻皮甾酮乳膏組的愈合速度還是明顯優(yōu)于其他各組，但領(lǐng)先1.25％蛻皮甾酮乳膏組的優(yōu)勢(shì)已沒有原來那么大。通過此研究可以看出：蛻皮甾酮乳膏確實(shí)有促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的作用，且2.5％蛻皮甾酮乳膏在創(chuàng)傷動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)中促愈效果最好，為其最佳有效濃度。 本實(shí)驗(yàn)中，通過病理切片觀察，空白對(duì)照組創(chuàng)面炎細(xì)胞大量滲出，肉芽組織形成及上皮細(xì)胞增生緩慢。而2.5％蛻皮甾酮乳膏組肉芽組織生

11、長(zhǎng)速度最快，上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的快速增值，使上皮爬行速度增快，新生的毛細(xì)血管較多，膠原形成明顯，創(chuàng)面于創(chuàng)傷后12d基本愈合。 5.結(jié)論： 目前國(guó)內(nèi)促進(jìn)傷口愈合的藥物有限，且主要以抗炎、止血、保護(hù)創(chuàng)面為主，但這些作用只對(duì)創(chuàng)傷早期有效，而對(duì)真正體現(xiàn)傷口愈合速度的促進(jìn)各種組織細(xì)胞增值的作用較小。本藥卻正是以促進(jìn)傷口各種組織細(xì)胞增值為主要作用機(jī)理。實(shí)驗(yàn)證明蛻皮甾酮乳膏對(duì)實(shí)驗(yàn)性兔創(chuàng)傷模型有明顯促愈作用，且其最佳有效濃度