20S蛋白酶體對SVZ神經(jīng)干細(xì)胞增殖潛能的調(diào)控作用.pdf

1、目的：觀察小鼠室管膜下區(qū)(Subventricularzone,SVZ)神經(jīng)干細(xì)胞(Neural Stem Cells，NSCs)20S蛋白酶體的表達，以及機體老化進程中SVZ20S蛋白酶體的活性變化，旨在揭示蛋白酶體活性改變對NSCs增殖潛能的影響，為延緩機體衰老進程提供新的突破方向。
　　 方法：將小鼠分為胚胎(Embryonic14 days，E14)、新生(Postnatal day，P0)、幼年(Postnatal30

2、 days，P30)、成年(Postnatal60 days，P60)、老年(Postnatal540 days，P540)5組。⑴應(yīng)用20S蛋白酶體/nestin(神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物)免疫熒光雙標(biāo)法觀察SVZ NSCs20S蛋白酶體的表達。⑵提取E14、P0、P30、P60、P540小鼠SVZ蛋白，通過Western Blot半定量分析不同年齡階段小鼠20S蛋白酶體的表達變化。⑶提取E14、P0、P30、P60、P540小鼠SVZ蛋白，

3、應(yīng)用熒光分光光度法檢測不同年齡階段小鼠20S蛋白酶體的活性。⑷將1μl MG132(30mg/kg)注入成年小鼠側(cè)腦室，分別在3d、7d后腹腔注射BrdU(5mg/kg)，通過免疫熒光染色觀察BrdU陽性細(xì)胞數(shù)，檢測蛋白酶體抑制劑對NSCs增殖潛能的影響。
　　 結(jié)果：①20S蛋白酶體免疫陽性細(xì)胞沿側(cè)腦室側(cè)壁分布，陽性細(xì)胞呈圓形，胞漿與胞核內(nèi)均可見陽性表達，并且20S蛋白酶體陽性表達與NSCs標(biāo)志物nestin共存，提示20S蛋

4、白酶體可能對NSCs具有調(diào)控作用。②Western Blot結(jié)果表明隨年齡增加20S蛋白酶體表達水平逐漸降低，其中胚胎小鼠SVZ20S蛋白酶體表達量最高(1.22±0.1)，老年小鼠20S蛋白酶體表達量最低(0.6±0.05)，二者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。③蛋白酶體活性檢測結(jié)果表明隨著年齡增加蛋白酶體活性出現(xiàn)遞減趨勢，其中胚胎、新生、幼年小鼠20S蛋白酶體活性顯著高于老年小鼠(P＜0.05)，但成年小鼠與老年小鼠20S蛋白

5、酶體活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。④MG132干預(yù)實驗結(jié)果顯示注入MG1323d、7d后腦室SVZBrdU陽性細(xì)胞減少，統(tǒng)計分析結(jié)果顯示注入MG1323d后BrdU陽性細(xì)胞數(shù)減少(2±0.1)，與溶劑對照DMSO組(22±3)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；注入MG1327d后BrdU陽性細(xì)胞數(shù)減少(3±1)，與溶劑對照DMSO組(8±3)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，提示蛋白酶體活性降低可導(dǎo)致NSCs增殖潛能下降