結核分枝桿菌H37Rv組氨醇脫氫酶基因的克隆、表達及酶學性質(zhì)分析.pdf

1、結核病是人類健康的大敵，每年導致約300萬人死亡，同時全球有將近三分之一的人口(20億)受到結核分枝桿菌的感染。由于耐藥菌株的出現(xiàn)，在治療結核病時，人類將面臨無藥可用的危險處境。2006年9月，世界衛(wèi)生組織發(fā)出警示：對目前所有藥物耐受的廣泛耐藥結核桿菌已經(jīng)出現(xiàn)。鑒于此，新型抗結核藥物的研發(fā)迫在眉睫。 基于藥物靶標的新藥開發(fā)是目前廣為采用的新藥開發(fā)策略。利用這種策略開發(fā)新藥，需要識別可作為藥物靶標的蛋白，并獲得該蛋白的三維結構數(shù)據(jù)

2、，再利用從頭設計或者虛擬篩選獲得具有抑制作用的先導化合物。 以潛伏狀態(tài)在宿主體內(nèi)長時間持留，是結核分枝桿菌致病的重要特性，也是結核病治療周期長的原因之一。目前大多數(shù)藥物僅對生長期的結核桿菌有效，因此，開發(fā)針對潛伏期結核桿菌的新型抗結核藥物意義重大。 我們以結核分枝桿菌H37Rv基因組為模板，擴增hisD基因，構建pET-28a-HDH重組質(zhì)粒；轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒到Ecoli BL21(DE3)并誘導表達，純化可溶性的結核分枝桿

3、菌L-組氨醇脫氫酶(HDH)，并對其性質(zhì)進行研究，結果表明：重組結核分枝桿菌L．組氨醇脫氫酶能以L-組氨醇和NAD<'+>為底物催化L-組氨醇生成L-組氨酸；該酶的最適pH值為8.3，最適溫度為45℃，比活力為1.788 L1/mg；Mn<'2+>、Ca<'2+>、Zn<'2+>、CO<'2+>等對酶促反應有激活作用；底物NAD<'+>和L-組氨醇的米氏常數(shù)分別為0.9765 mmol/L和2.755μmol/L；25℃時重組蛋白的二級