肝腎陰虛型甲亢和脾腎陽虛型甲減的血漿蛋白質(zhì)組學比較分析.pdf

1、甲狀腺功能亢進癥（hyperthyroidism，簡稱甲亢）系由多種病因?qū)е录谞钕俟δ茉龈撸谞钕偎兀═H）分泌過多所致的臨床綜合征。在中醫(yī)學中歸屬“癭瘤”范疇，其發(fā)病原因主要在于“肝腎陰虛”。而與之相反，甲狀腺功能減退癥（hypothyroidism,簡稱甲減）則是由于甲狀腺激素合成和分泌減少或組織利用不足導致的全身代謝減低綜合征。在中醫(yī)學中歸屬“虛勞”或“虛損”范疇，其發(fā)病原因主要在于“脾腎陽虛”。甲亢是內(nèi)分泌系統(tǒng)的常見病、多發(fā)病，

2、每年發(fā)生率高達2～3‰，且有逐年增高的趨勢；甲減則是一種很難治愈的疾病，因此目前降低甲亢甲減的發(fā)生率是一項非常重要的任務(wù)。
　　目的：本實驗利用雙向凝膠電泳及質(zhì)譜技術(shù)，對肝腎陰虛型甲亢和脾腎陽虛型甲減病人的血漿蛋白質(zhì)進行分析。以期從蛋白質(zhì)組學的角度研究其血清中蛋白質(zhì)的變化，從而闡述甲亢甲減的發(fā)病機理，為早診斷早治療提供的理論依據(jù)。
　　方法：取正常、甲亢、甲減患者血清各8例，分別混合后用抗白蛋白和免疫球蛋白的親和層析柱去除高

3、豐度蛋白質(zhì)，用超濾離心法對樣品進行除鹽濃縮。進行蛋白質(zhì)雙向電泳分離，經(jīng)圖象掃描、軟件分析得到差異蛋白質(zhì)。挖取差異蛋白質(zhì)點，經(jīng)膠內(nèi)酶解后，用質(zhì)譜儀測定后獲得肽指紋圖譜，所得結(jié)果與蛋白質(zhì)組文庫進行比對。
　　結(jié)果：三組實驗對比分析發(fā)現(xiàn)，肝腎陰虛型甲亢和正常對照組平均蛋白點數(shù)為456個；脾腎陽虛型甲減和正常對照組平均蛋白點數(shù)為522個；肝腎陰虛型甲亢和脾腎陽虛型甲減組患者的平均蛋白點為582個。膠內(nèi)酶切后經(jīng)基質(zhì)輔助激光電離飛行時間質(zhì)譜（

4、MALDI TOF MS+MS/MS）進行檢測發(fā)現(xiàn)：肝腎陰虛型甲亢和正常對照組比較，12個蛋白點被確定，其中4個蛋白質(zhì)點表達均降低：視黃醇結(jié)合蛋白、甲狀腺素結(jié)合蛋白B鏈、轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白、載脂蛋白Apo-Ⅳ；其余蛋白點:鉀通道調(diào)節(jié)蛋白、β2-微球蛋白、人類白細胞DR抗原β1（HLA-DRβ1）、MHC-Ⅱ、胰島素生長因子-2、果糖二磷酸醛縮酶C、核轉(zhuǎn)錄因子kB亞單位及蛋白酪氨酸磷酸酶表達均升高。脾腎陽虛型甲減和正常對照組比較，蛋白點表達均

5、升高的是：轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白、前載脂蛋白 A-I、Na/H交換蛋白1、STarD6、鋅a-2糖蛋白A鏈，其余蛋白如MHC-Ⅱβ鏈、泛素C末端水解酶、胰島素生長因子-2和磷酸肌醇激酶4表達降低。肝腎陰虛型甲亢與脾腎陽虛型甲減比較，前載脂蛋白A-Ⅰ和轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白表達降低，NADH輔酶脫氫酶E鏈、短鏈脫氫酶/還原酶、丙酮酸激酶、細胞色素 P450、超氧化物歧化酶2、干擾素調(diào)節(jié)因子5、胰島素生長因子-2、血紅素氧合酶蛋白均升高。
　　結(jié)論：

6、肝腎陰虛型甲亢組能量代謝活躍，氧化磷酸化和檸檬酸循環(huán)加速。在以MHC-II和NF-kB的過度表達為核心的細胞因子及信號轉(zhuǎn)導因子功能紊亂，可能引發(fā)了甲狀腺功能亢進的發(fā)生。這些發(fā)現(xiàn)提示肝腎陰虛證的發(fā)病機理和能量代謝亢進、神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)失衡等有相關(guān)性。相反，脾腎陽虛型甲減組能量代謝減低，合成代謝的速度大于分解代謝的速度。其發(fā)病機理可能是通過下調(diào)胰島素生長因子2和干擾素因子5的表達，和氧應(yīng)激、細胞免疫、信號傳遞等存在相關(guān)性。肝腎陰虛型甲