一種新的促進(jìn)體外培養(yǎng)肝細(xì)胞活性及增殖的方法.pdf

1、體外肝細(xì)胞培養(yǎng)是生物制藥和人工肝支持系統(tǒng)的技術(shù)基礎(chǔ)。體外培養(yǎng)肝細(xì)胞的活性低、增殖能力差一直是制約其發(fā)展的瓶頸問(wèn)題，怎樣提高肝細(xì)胞活性及增殖能力是目前研究的熱點(diǎn)。本課題將中藥黃芪（AM）、當(dāng)歸（AN）與體外肝細(xì)胞培養(yǎng)相結(jié)合，研究其對(duì)肝細(xì)胞形態(tài)及生理功能的影響，目前這方面的研究少見(jiàn)報(bào)道。并且首次以血清藥理學(xué)方法研究了兩者的不同比例對(duì)肝細(xì)胞的形態(tài)及生理功能的影響，為進(jìn)一步提高體外培養(yǎng)肝細(xì)胞活性及得率提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，以及為臨床肝病治療提供新的藥物

2、。 研究含藥血清對(duì)細(xì)胞形態(tài)及生理功能的影響：分別給日本大耳白兔灌胃AM、AN以及不同比例的AMAN合劑，制備對(duì)照血清及含藥血清，以制備的血清培養(yǎng)被H2O2氧化的L02細(xì)胞，以全自動(dòng)生化檢測(cè)儀測(cè)定Alb及ALT含量，以3H-TdR摻入法和MTT法測(cè)定L02細(xì)胞增殖情況，透射電鏡觀察細(xì)胞微結(jié)構(gòu)的變化，得到以下結(jié)論：(1) AM與AN比例為3：1時(shí)Alb分泌明顯增加(P<0.01)、ALT含量明顯降低(P<0.01)。結(jié)果提示AM與A

3、N比例為3：1時(shí)促進(jìn)L02細(xì)胞分泌功能，提高細(xì)胞膜穩(wěn)定性；(2) 透射電鏡觀察：AM與AN比例為3：1組細(xì)胞器豐富,以粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體為主，少見(jiàn)凋亡小體，是促進(jìn)L02細(xì)胞的分泌功能及抑制凋亡的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。(3) AM與AN比例為3：1組OD值與CPM值明顯增加(P<0.05)，提示AM與AN比例為3：1時(shí)L02細(xì)胞的增殖能力明顯增加。 研究AMAN對(duì)L02細(xì)胞增殖能力影響的機(jī)制：采用免疫組織化學(xué)染色(SABC法)測(cè)定AM與AN