豚鼠Oddi括約肌的可能調(diào)控機(jī)制.pdf

1、Oddi括約肌(sphincterofoddi，SO)是控制膽汁排出膽道的唯一門戶，對(duì)膽囊充盈，膽汁排出及膽道系統(tǒng)正常壓力的維持等具有重要作用。Oddi括約肌功能障礙(sphincterofoddidysfunction，SOD)是臨床上的常見病和多發(fā)病。因此，闡明SO運(yùn)動(dòng)調(diào)控機(jī)制，對(duì)于臨床理解膽道系統(tǒng)疾病的病理生理和相關(guān)疾病的治療具有重要意義。 近年研究表明胃腸道自主節(jié)律性運(yùn)動(dòng)起搏細(xì)胞——Cajal細(xì)胞(interstitia

2、lcellsofCajal，ICC)或Cajal樣細(xì)胞(interstitialCajal-likecells)不僅存在于胃腸道內(nèi)，而且亦存在于消化道以外具有自主節(jié)律性運(yùn)動(dòng)功能的器官。生理狀態(tài)下，SO具有一定的自主節(jié)律性運(yùn)動(dòng)的特性，但SO內(nèi)是否存在ICC尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。 腸神經(jīng)系統(tǒng)(entericnervoussystem，ENS)對(duì)SO具有重要的調(diào)節(jié)作用。其中，膽堿能和腎上腺素能神經(jīng)對(duì)SO功能調(diào)控的研究較多，但ENS的主要組成

3、成分之一的非腎上腺素、非膽堿能(nonadrenergic-noncholinergic，NANC)神經(jīng)對(duì)SO的作用研究相對(duì)較少。已經(jīng)明確NANC神經(jīng)遞質(zhì)之一的一氧化氮(nitricoxide，NO)對(duì)胃腸平滑肌具有較強(qiáng)的抑制作用，據(jù)報(bào)道這種作用可能是ICC介導(dǎo)的。生理實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，NO對(duì)人和豬SO的運(yùn)動(dòng)具有抑制作用，這種抑制作用是否通過ICC介導(dǎo)尚不清楚。而且，膽囊收縮素(cholecystokinin，CCK)對(duì)SO的作用是否與NO

4、或ICC有關(guān)，是值得深入探討的問題。 因此，本研究采用豚鼠SO石蠟切片的HE染色，冰凍切片的ICC特異性標(biāo)志物c-Kit蛋白和CCK的特異性抗體的免疫細(xì)胞化學(xué)染色及NADPH-d組織化學(xué)染色顯示NO神經(jīng)等方法，從形態(tài)學(xué)角度對(duì)豚鼠SO的可能調(diào)控因素進(jìn)行較詳細(xì)的觀察，期望為闡明SO的運(yùn)動(dòng)調(diào)控機(jī)制提供新的形態(tài)學(xué)依據(jù)。 主要結(jié)果如下： 一、豚鼠與大鼠SO的組織結(jié)構(gòu)比較 HE染色可見：豚鼠SO僅由膽管末端發(fā)達(dá)的平滑

5、肌構(gòu)成，未見胰管、共同通道及開口?？v切面可見豚鼠SO分為二個(gè)壁：外側(cè)壁和十二指腸內(nèi)壁，前者在結(jié)構(gòu)上類似腸壁，由內(nèi)環(huán)和外縱兩層平滑肌組成，后者由內(nèi)外兩層縱行和中間環(huán)行平滑肌組成，切片上較容易區(qū)分。與豚鼠相比，大鼠膽管末端無SO裝置，所以，本研究主要以豚鼠為研究對(duì)象。 二、豚鼠SO內(nèi)ICC樣細(xì)胞的分布模式 ICC特異性標(biāo)記物c-Kit蛋白的單克隆抗體的免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示：豚鼠SO縱切面可見外側(cè)壁的深肌叢和肌間神經(jīng)叢周圍存在

6、較多的c-Kit陽(yáng)性細(xì)胞，其形態(tài)特點(diǎn)分別與小腸壁內(nèi)的ICC-DMP和ICC-MY類似，而在十二指腸內(nèi)壁，可見大量c-Kit陽(yáng)性細(xì)胞和突起分布于肌層內(nèi)，以中間的環(huán)肌內(nèi)數(shù)量最多，其形態(tài)特點(diǎn)與小腸的ICC-IM相似。SO橫切面可見環(huán)行平滑肌纖維間散在分布少量的c-Kit陽(yáng)性細(xì)胞，胞體呈長(zhǎng)梭形，兩端伸出細(xì)長(zhǎng)突起，長(zhǎng)軸平行于環(huán)行平滑肌，其形態(tài)特征與胃腸壁的ICC-IM非常相似，而在SO與十二指腸移行區(qū)內(nèi)的環(huán)縱肌之間的c-Kit陽(yáng)性細(xì)胞呈橢圓形或三

7、角形，常見三個(gè)以上短小突起且有分支，其形態(tài)特征與小腸壁內(nèi)的ICC-MY類似。 三、豚鼠SO內(nèi)NOS陽(yáng)性神經(jīng)分布模式及其與ICC樣細(xì)胞的關(guān)系 1.NADPH-d組織化學(xué)染色可見：在縱切面，NOS陽(yáng)性神經(jīng)纖維較豐富，廣泛分布于平滑肌層內(nèi)，以肌間神經(jīng)叢最豐富。每個(gè)神經(jīng)節(jié)內(nèi)含有數(shù)個(gè)～十幾個(gè)NOS陽(yáng)性神經(jīng)元，輪廓較清晰，胞體為圓形，胞漿呈深淺不等的藍(lán)色，胞核不著色。在橫切面可見NOS陽(yáng)性神經(jīng)纖維常呈點(diǎn)狀分布。另外，在十二指腸粘膜和

8、Vater壺腹粘膜的腺細(xì)胞間亦存在一些NOS陽(yáng)性內(nèi)分泌細(xì)胞。 2.與免疫細(xì)胞化學(xué)雙重染色可見平滑肌層內(nèi)c-Kit陽(yáng)性細(xì)胞的突起常分布在NOS陽(yáng)性神經(jīng)附近，但未見二者有共存現(xiàn)象。 四、NOS陽(yáng)性內(nèi)分泌細(xì)胞與CCK陽(yáng)性內(nèi)分泌細(xì)胞間的可能關(guān)系 1.NOS陽(yáng)性內(nèi)分泌細(xì)胞的分布規(guī)律：NADPH-d組織化學(xué)染色顯示NOS陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于豚鼠的十二指腸乳頭周圍的黏膜小腸腺中下部細(xì)胞間或腺泡旁，Vater壺腹黏膜的腺體和黏膜上

9、皮細(xì)胞間亦可見一定數(shù)量的NOS陽(yáng)性細(xì)胞，但大鼠胃腸道和膽道的黏膜內(nèi)未見NOS陽(yáng)性細(xì)胞。 2.CCK陽(yáng)性內(nèi)分泌細(xì)胞的分布規(guī)律：應(yīng)用CCK的免疫細(xì)胞化學(xué)染色可見，CCK陽(yáng)性內(nèi)分泌細(xì)胞主要分布于十二指腸黏膜腸腺的中下部細(xì)胞間，黏膜上皮細(xì)胞間亦可見少量CCK陽(yáng)性細(xì)胞。與NADPH-d組織化學(xué)雙重染色結(jié)果表明，CCK陽(yáng)性細(xì)胞與NOS陽(yáng)性細(xì)胞無共存現(xiàn)象，但兩者的分布較近，提示可能存在一定的關(guān)系。 3.應(yīng)用在體和離體實(shí)驗(yàn)探討NOS陽(yáng)性