阿爾茨海默氏病患者腦組織及經β-淀粉樣蛋白處理的神經細胞中炎癥因子的改變.pdf

1、目的：通過檢測阿爾茨海默氏?。ˋlzheimer Disease,AD）患者腦組織及經β-淀粉樣蛋白（β-Amyloid peptide，Aβ）處理的人神經母細胞瘤細胞（Neuroblastoma cell，SH-SY5Y）中核轉錄因子（Nuclear Factor,NF）-κBp65、炎癥趨化因子單核細胞趨化蛋白1（Monocyte chemoattractant protein1，MCP-1/CCL-2）及巨噬細胞炎性蛋白-1α（M

2、acrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α/CCL-3）的表達，檢測不同聚集形式Aβ對神經型尼古丁乙酰膽堿能受體（Neuronalnicotinic acetylcholine receptors，nAChRs）及炎性因子表達改變的影響等，來探討炎性因子在AD發(fā)病機制中的作用和神經尼古丁乙酰膽堿受體的抗炎效果。
　　方法：選擇10例 AD患者及8例對照組成年人腦組織，用免疫組織化學方法檢測海馬

3、結構、額葉及顳葉皮質中 NF-κBp65、MCP-1、MIP-1α、GFAP等細胞因子的表達，用免疫組化雙染色方法檢測 GFAP和Aβ的同步表達、用熒光免疫方法檢測不同類型 Aβ表達；用 Aβ1-42處理體外培養(yǎng)的SH-SY5Y細胞，采用Western blotting，Elisa及Real-time PCR方法分別檢測細胞中 NF-κBp65、MCP-1、MIP-1α的蛋白及 mRNA表達水平；用不同聚集形式的Aβ處理 SH-SY5Y

4、細胞后測定 nAChRα3和α7亞單位及炎性因子 TNF-α、MCP-1和MIP-1α蛋白的表達。用 Aβ處理α3 nAChRmRNA沉默后的SH-SY5Y細胞，然后用Western blotting，Elisa及Real-time PCR檢測各組細胞中NF-κBp65和TNF-α、MCP-1、MIP-1α的蛋白及 mRNA表達情況。
　　結果：與對照組相比，AD患者腦組織海馬齒狀回、CA1-4各區(qū)、額葉皮質、顳葉皮質等部位均顯示

5、神經細胞中 NF-κBp65表達明顯增高（P<0.05）；MCP-1及 MIP-1α在神經細胞及膠質細胞中表達均增多（P<0.05）；GFAP顯示的神經星形膠質細胞數增多（P<0.05）并大量聚集在老年斑周圍。經 Aβ處理的SH-SY5Y細胞中 NF-κBp65、MCP-1、MIP-1α蛋白及 mRNA表達水平均增高（P<0.05）。相關系數分析表明，在 AD人腦組織中 MCP-1、MIP-1α蛋白水平與 NF-κBp65的改變有關。<

6、br>　　AβOs主要在神經細胞內表達，齒狀回顆粒細胞、海馬 CA1-CA4錐體細胞及內嗅區(qū)皮質各層神經元胞體及突起內均見棕黃顆粒狀陽性表達，此外，小血管壁也見到 AβOs陽性表達。AD患者及老齡對照者海馬結構中均見 AβOs陽性表達。與老齡對照者相比，AD患者海馬各區(qū)錐體細胞及內嗅區(qū)皮質各層神經元 AβOs表達明顯增強（P<0.05，P<0.01）。
　　采用1μmol/L濃度的Aβ1-42單體、纖絲體及寡聚體處理SH-SY5Y

7、細胞48小時后與對照組相比，Aβ寡聚體處理組α3、α7nAChRs蛋白表達水平明顯降低，炎性因子明顯升高（P<0.05）。
　　與對照組相比較，Aβ1-42使α3 nAChR siRNA處理后的SH-SY5Y細胞中 NF-κBp65、TNF-α蛋白及 mRNA表達水平明顯增加（P<0.05） MCP-1、MIP-1α蛋白及 mRNA表達水平未見明顯改變。
　　結論：AD發(fā)病中，Aβ可引起腦組織和培養(yǎng)的神經細胞中炎癥因子表達增