纖維蛋白(原)促血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、血管腔樣結(jié)構(gòu)形成的機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討纖維蛋白(fibrin)在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)增殖和血管腔樣結(jié)構(gòu)形成過(guò)程中的作用，并探討其可能的影響機(jī)制。 方法：1、培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，觀察低(0.5mg/ml)、中(3mg/ml)、高(6mg/ml)濃度的纖維蛋白作用下，對(duì)新生血管形成的影響；采用MTT和流式細(xì)胞法，觀察作用最顯著組的纖維蛋白對(duì)細(xì)胞增殖的影響；2、采用實(shí)時(shí)熒光定量R

2、T-PCR檢測(cè)不同濃度(0mg/ml、0.5mg/m、1.5mg/ml、3mg/ml、4.5mg/ml、6mg/ml)和時(shí)間(6h、12h、24h)的纖維蛋白作用下，MAP1LC3(Microtubule-associatedprotein1lightchain3)的基因表達(dá)以及在免疫熒光下晚期自噬囊泡和LC3在胞漿的變化；應(yīng)用上述濃度和時(shí)間檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的基因表達(dá)情況；3、采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)不同濃度和時(shí)

3、間的血管內(nèi)皮-鈣粘蛋白(Vascularendothelial-cadherin；VE-cadherin)和一種新型的肌動(dòng)蛋白骨架調(diào)節(jié)分子IQGAP3的表達(dá)情況；采用免疫熒光標(biāo)記法觀察纖維蛋白作用下，F(xiàn)-actin骨架蛋白結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果：1、在不同濃度纖維蛋白的干預(yù)下，均有血管腔樣結(jié)構(gòu)的形成，但以高濃度組(6mg/ml)作用顯著；并且，伴隨有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用；無(wú)纖維蛋白的對(duì)照組，未見(jiàn)有血管腔樣結(jié)構(gòu)形成。2、在血管腔樣結(jié)構(gòu)形

4、成中，伴隨有自噬基因LC3的表達(dá)變化，呈濃度和時(shí)間依賴性增加，免疫熒光染色也表明了晚期自噬囊泡和LC3在胞漿的表達(dá)增多，VEGF的表達(dá)也隨著自噬的激活而增加。3、在血管腔樣結(jié)構(gòu)形成中，VE-cadherin的表達(dá)隨著纖維蛋白濃度和時(shí)間變化呈增加趨勢(shì)，尤其在高濃度組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：而F-actin則在細(xì)胞的周邊以及胞核周圍由分布均勻變成失去極性的應(yīng)力纖維。IQGAP3基因表達(dá)伴隨著VE-cadherin的變化也呈現(xiàn)了上升趨勢(shì)。