慢性EECP延緩早期AS病變內(nèi)皮機(jī)制的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、背景：慢性增強(qiáng)型體外反搏(EECP)作為一種有效的非藥物治療手段已被列入AHA穩(wěn)定型心絞痛治療指南，但其治療冠心病/心絞痛的確切機(jī)制，尤其是分子機(jī)制大部分仍不清楚。體外細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，適當(dāng)?shù)那袘?yīng)力刺激可引起ECs生物學(xué)特性改變，包括形態(tài)學(xué)改變和基因表達(dá)及蛋白質(zhì)合成、分泌的變化，如一些抗AS基因/蛋白質(zhì)表達(dá)的上調(diào)。眾所周知，EECP可提高血流切應(yīng)力。因此，我們假設(shè)慢性EECP通過調(diào)節(jié)ECs相關(guān)蛋白質(zhì)合成、分泌，修復(fù)受損的內(nèi)皮，從而拮抗AS形

2、成。 目的：1、建立豬慢性體外反搏模型；2、觀察慢性EECP對高脂血癥豬血管AS病變的影響；3、觀察慢性EECP對高脂血癥豬血管ECs形態(tài)的影響；4，觀察慢性EECP對血脂代謝的影響；5、利用蛋白質(zhì)組學(xué)手段檢測慢性EECP對高脂血癥豬胸主動脈ECs合成的影響。 方法：19頭3.5月齡豬，在肌肉注射速眠新Ⅱ(846合劑)和靜脈注射3％戊巴比妥鈉麻醉下，用0.035MPa/cm2的壓力進(jìn)行反搏，每次反搏2h，隔天反搏1次，共

3、計(jì)36h。另有39只乳豬隨機(jī)分為正常對照組(簡稱正常組，n=8)、高脂對照組(簡稱高脂組，n=12)和高脂反搏組(簡稱反搏組，n=19)。給予高脂飼料喂養(yǎng)建造豬高膽固醇血癥模型，反搏組動物按照上述方案對反搏組豬進(jìn)行EECP。反搏36h后，心腔注射過量的10％氯化鉀處死動物，取腹主動脈進(jìn)行大體蘇丹染色，取冠狀動脈前降支(LAD)進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡檢查，收聚用膠原酶消化的胸主動脈ECs進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)檢測，同時檢測反搏前和反搏3

4、6h后動物血脂水平和肝腎功能。 結(jié)果：EECP按照預(yù)定的方案順利完成，并獲得了標(biāo)準(zhǔn)的反搏指脈波形、頸動脈的壓力和血流曲線及頸動脈血流多普勒頻譜，同時反搏前后反映肝腎功能的指標(biāo)無顯著變化。大體蘇丹染色發(fā)現(xiàn)，反搏組腹主動脈AS病變面積百分比和大體病變積分明顯低于高脂組，卻顯著高于正常組。HE染色發(fā)現(xiàn)，反搏組顯微病變積分明顯低于高脂組，而顯著高于正常組；高脂組冠狀動脈可見典型的AS斑塊造成血管腔狹窄，反搏組僅見局部內(nèi)膜增厚。掃描電鏡發(fā)

5、現(xiàn)，高脂組冠狀動脈ECs排列紊亂，ECs脫落明顯，內(nèi)皮損傷嚴(yán)重；反搏組冠狀動脈ECs沿血流切應(yīng)力方向呈流線型排列，ECs脫落顯著減少，內(nèi)皮損傷較輕。透射電鏡檢查發(fā)現(xiàn)，高脂組冠狀動脈ECs凋亡、脫落，ECs間連接斷裂，內(nèi)膜破損，平滑肌細(xì)胞侵入和增生，形成平滑肌源性泡沫細(xì)胞；反搏組冠狀動脈ECs呈梭形，內(nèi)皮與內(nèi)皮下結(jié)構(gòu)連接緊密，內(nèi)膜增厚，平滑肌輕度增生。血脂監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，反搏36h后，反搏組TC、LDL、和TG均顯著低于高脂組卻顯著高于正常組，

6、HDL則顯著高于其它兩組；高脂組TG、LDL增加程度明顯高于反搏組；高脂組的HDL輕度下降，而反搏組的HDL明顯升高；高脂組的TG增加，而反搏組的TG顯著降低。蛋白質(zhì)組學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，反搏組動物胸主動脈ECs有7種高表達(dá)的蛋白質(zhì)，其中有些屬于與細(xì)胞的變形、遷移和粘附有關(guān)的細(xì)胞骨架系統(tǒng)，如Vimentin、Moesin和LPP等；有些與細(xì)胞的生長有關(guān)，如AK1、LBP和Moesin等；有些是細(xì)胞代謝相關(guān)的酶，如AAP、2,3-BPGM和AK1