Frat2與非小細胞肺癌患者的惡性表達和不良預后相關.pdf

1、前言：
　　細胞信號轉導是當今生物醫(yī)學研究領域最前沿、最活躍的主題之一。Wnt信號轉導途徑由一系列癌基因和抑癌基因編碼的蛋白質組成，是傳遞生長刺激信號的通路，它對控制胚胎發(fā)育起重要作用，而其不恰當?shù)幕罨瘏⑴c多種人類癌癥的發(fā)病過程[1]。
　　Frat最初被證實是T細胞淋巴瘤的原癌基因，但它的生物學功能一直令人困惑，直到它在爪蟾的同源物GBP作為GSK3結合蛋白被分離出后，人們才知道Frat也是Wnt信號轉導通路的重要組成部分

2、[2]。人類Frat家族包括Frat1和Frat2，F(xiàn)rat/GBP作為GSK3的結合蛋白，抑制了GSK3對β-catenin的磷酸化作用[3]，在Wnt信號轉導途徑中起正調節(jié)作用。但仍然有許多問題需要研究，例如，重新評估Frat在Wnt信號轉導途徑中的作用，是否存在具有Frat內(nèi)在功能的潛在替代物等。目前，F(xiàn)rat2在肺癌組織中的表達還沒有明確報道，以此我們通過對Frat2在肺癌組織中的表達檢測，進一步了解Frat2蛋白在Wnt信號轉

3、導通路的作用及機制，同時進一步了解對肺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉移機制及診斷和預后的意義。
　　材料與方法：
　　1、材料
　　212例原發(fā)性肺癌組織標本，均取自中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院2004年8月-2008年12月胸外科手術切除的標本。所有患者術前均未接受放、化療。標本經(jīng)10％中性甲醇固定，石蠟包埋，HE常規(guī)染色后明確診斷。分別出兩名病理醫(yī)師根據(jù)2009年肺癌TNM分期系統(tǒng)和WHO肺癌分類標準，確定腫瘤的組織類型以及臨床病

4、理分期。包括:鱗癌85例，腺癌114例，其他類型13例;高分化68例，中分化100例，低分化25例;有淋巴結轉移者79例，無淋巴結轉移者133例;Ⅰ期90例，Ⅱ期61例，Ⅲ期53例，Ⅳ期8例。性別:男性143例，女性69例。年齡:39-82歲，中位年齡60歲。對全部212例進行了術后隨訪，隨訪日期計算從手術日起，到因復發(fā)/轉移而死亡或隨訪截止日期為止，截止日期為2014年1月25日。
　　2、主要試劑和來源
　　SP免疫組化

5、試劑盒、DAB酶底物顯色試劑盒、0.01M PBS、檸檬酸抗原組織修復液(PH6.0);一抗為羊抗人Frat2多克隆抗體(Santa Cruz Biotechnology，SantaCruz，CA，USA1∶100)
　　3、實驗方法
　　免疫組織化學染色及結果判定組織標本經(jīng)10％中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，制成4μm連續(xù)切片。采用鏈霉素生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法(S-P法)檢測Frat2的表達。結果判定:選腫瘤細

6、胞陽性染色集中區(qū)域，每張切片計數(shù)400個癌細胞，由兩名病理醫(yī)師雙盲觀測。Frat2表達判定標準:以胞漿或核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色染色顆粒為陽性信號，陽性細胞數(shù)≤10％為陰性表達;＞10％為陽性表達。
　　結果：
　　免疫組化結果顯示，F(xiàn)rat2在212例癌組織中高表達，表達率為64.6％(137/212)，明顯高于癌旁肺組織中的表達。統(tǒng)計結果顯示:Frat2在癌旁肺組織和肺癌組織中的表達有明顯的差異，具有統(tǒng)計學意義。Frat2異常表達