CL-316243對(duì)小鼠脂肪細(xì)胞中UCP1表達(dá)的影響及相關(guān)通路的探討.pdf

1、研究背景：
　　人和哺乳動(dòng)物體內(nèi)有兩種脂肪組織，即白色脂肪組織(White adipose tissue，WAT)和棕色脂肪組織(brown adipose tissue，BAT)。WAT由幾乎沒有線粒體的大單房細(xì)胞組成，通過甘油三酯儲(chǔ)存能量;而BAT則是由含有大量線粒體的小多房細(xì)胞組成，并通過線粒體及表達(dá)解偶聯(lián)蛋白1(un coupling protein1，UCP1)產(chǎn)熱來消耗能量。以前認(rèn)為胎兒及新生兒期棕色脂肪較多，并隨著年

2、齡的增長(zhǎng)而逐漸減少至消失，但近來研究表明它仍在成人中存在，并對(duì)維持體溫和能量平衡起重要作用。線粒體內(nèi)膜的解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)是一種在棕色脂肪組織中特異表達(dá)的線粒體內(nèi)膜蛋白質(zhì)，能增加機(jī)體產(chǎn)熱，是決定BAT功能的關(guān)鍵因素。
　　近年來，隨著生活方式的改變和生活水平的提高，超重和肥胖也迅速蔓延開來，尋求高效的減肥藥物成為了當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。選擇性β3腎上腺素能受體激動(dòng)劑能刺激白色脂肪組織的脂解作用和棕色脂肪組織的非顫栗性產(chǎn)熱，抑制脂肪

3、細(xì)胞的分化，并能誘導(dǎo)白色脂肪組織中出現(xiàn)棕色脂肪細(xì)胞，從而消耗儲(chǔ)脂，起到抗肥胖作用，因此引起了大家的關(guān)注。CL-316243作為一種選擇性β3腎上腺素能受體激動(dòng)劑，它是否能誘導(dǎo)白色脂肪組織中出棕色脂肪細(xì)胞及其中涉及到的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑需進(jìn)一步研究。
　　目的：
　　探討β3腎上腺素能受體激動(dòng)劑(β3-adrenocepto ragonist，β3-ARs)CL-316243對(duì)小鼠脂肪細(xì)胞中解偶聯(lián)蛋白1(un coupling

4、protein1，UCP1)表達(dá)的影響及其是否涉及環(huán)磷酸腺苷(cyclase adenosine monophos phate，cAMP)-蛋白激酶A(protein kinase A，PKA)和p38/絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)信號(hào)通路。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　將3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)成為脂肪細(xì)胞，采用油紅O染色法鑒定脂肪細(xì)胞。將脂肪細(xì)胞分為4組:對(duì)

5、照組(A)，10-7mol/LCL-316243聯(lián)合10μmol/L的PKA抑制劑H-89組(B)，10-7mol/LCL-316243聯(lián)合10μmol/L的p38MAPK抑制劑SB203580組(C)，10-7mol/LCL-316243組(D)。各組中試劑作用脂肪細(xì)胞48h后，提取A和D組中細(xì)胞總蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度，然后酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme linked immuno sorbent assay，ELISA）檢測(cè)

6、A和D組細(xì)胞中蛋白激酶A(Protein Kinase A，PKA)的濃度，蛋白質(zhì)印跡法(Westernblot)檢測(cè)A和D組細(xì)胞中p38的磷酸化程度;提取4組細(xì)胞總RNA，RT-PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中UCP1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。
　　結(jié)果：
　　1.10-7mol/LCL-316243組(D)中PKA的濃度為（412.76±6.94）U/L，較對(duì)照組(A)中PKA的濃度(336.45±5.52)U/L明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義（P＜0.05）。
　　2.10-7mol/LCL-316243組(D)中p38的磷酸化程度即p-p38/p38為（54.69±2.39）％，較對(duì)照組中p38磷酸化程度（42.03±1.28）％明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.A、B、C和D組中的UCP1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平分別為:（0.43±0.01）、（0.43±0.01）、（0.44±0.01）、（0.58±0.01），因此①10-7mol/LC

8、L-316243組(D)中UCP1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平較對(duì)照組(A)和10-7mol/LCL-316243聯(lián)合PKA抑制劑H-89組(B)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而10-7mol/LCL-316243聯(lián)合H-89組(B)中UCP1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照組(A)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，說明CL-316243作用于小鼠脂肪細(xì)胞后可促進(jìn)UCP1的表達(dá)，并可能涉及到cAMP-PKA信號(hào)通路;②10-7mol/L

9、CL-316243組(D)中UCP1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平較對(duì)照組(A)和10-7mol/LCL-316243聯(lián)合p38MAPK抑制劑SB203580(C)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而10-7mol/LCL-316243聯(lián)合SB203580組(C)中UCP1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照組(A)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明在CL-316243促進(jìn)小鼠脂肪細(xì)胞中UCP1的表達(dá)過程中，p38/MAPK信號(hào)通路也可能起一