PHA對CIK細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒活性影響的研究.pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文PHA對CIK細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒活性影響的研究姓名：秦福麗申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：血液內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：張紹林孫慧20030420幫州太學(xué)2003屆碩士畢啦論文PHA對CIK細(xì)胞增藏和細(xì)胞毒活性影響的研究豹弩熳、結(jié)腸癌露淋巴瘸癔人，遴牙l勰糕痰試驗，發(fā)現(xiàn)瘸入農(nóng)漶中IFN￥、GM—CSF和TGF一舀的水平翡顯增商，矯周血中的CD3淋巴細(xì)胞增多，外周血淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒活性比治療前肖部分提高。隨著對CIK細(xì)胞研究的進展，人們正

2、逐瀕改進CIK鯉照瓣髂強培養(yǎng)秘處理方法，以便選一步提毫CIK綱鼴黲增殖攀及緬脆毒活靛。植耪血凝素(PHA)是T細(xì)臆的多克隆活化黼，可刺激靜止贛T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，l臨床上可以作為免疫調(diào)節(jié)劑。本實驗擬用PHA先刺激夕周巍單個核細(xì)魅24小時，再按常規(guī)CIK細(xì)胞培養(yǎng)方法繼續(xù)培券，探討PHA的翻入能否提離CIK緩蕊的增蘩率及綴臆毒活性，秀嵇床廢爝提供瑗論耬實驗依據(jù)。方法從歪常德康人外周斑分離攀個核纓縋，每鍘撂本分為涎綴進行培養(yǎng)。一維按常規(guī)C

3、IK細(xì)胞培養(yǎng)方法，郎第0天加入IFNY(1000U／m1)，入培養(yǎng)箱孵育24小時后再加入IL2(300U／m1)、抗CD3單抗(25ng／m1)繼續(xù)培養(yǎng)。另一組于第0天熬入PHA(20|lg／m1)，24小黠蓐按常規(guī)CIK纓腿壤券方法繼續(xù)壤券。每3—4夭根據(jù)細(xì)胞濃度添加新鮮RPMll640完全培養(yǎng)液(內(nèi)禽10％自體盎漿、25mmol／LHepes、100u／礎(chǔ)青霉素、100U／ml鏈霉索)，并補加IL2至300U／ml。培養(yǎng)過程中動態(tài)雙

4、察纓腿形態(tài)學(xué)變化。壤養(yǎng)至第15天，贈取細(xì)胞進囂各項梭測：①作旒氏染色、糖瀠染色和緬施滔力溯定。②緇施計數(shù)，測其磺蕉倍數(shù)。⑧各組綴胞均用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞免痰表趔，用單抗CD3、CD4、CD8、CD56、CDl9掾標(biāo)記。④用K562細(xì)臌株、食蟄蠛細(xì)胞揀和初治急性白血瘸病人的骨髓幼雅繃脆作為靶細(xì)稔，廂MTT法稔測CIK縮耱、PHA—CIK緇塍豹纓穩(wěn)毒活性。結(jié)果1。在墻莠過程中，兩組細(xì)胞的胞體和胞核均增大，胞漿增多，部分細(xì)胞胞漿中出溪顙粒、空