5-LO表達(dá)與鋁鹽致海馬神經(jīng)元損傷的關(guān)系研究.pdf

1、目的：建立氯化鋁致原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元損傷模型，探討5-LO的表達(dá)與鋁鹽致海馬神經(jīng)元損傷的關(guān)系。
　　 方法：
　　 （1）新生24h內(nèi)SD大鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)，7天后用免疫組化鑒定純度；給予氯化鋁（Al3+200μmol·L-1）建立原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元損傷模型。
　　 （2）以HE染色及熒光顯微鏡觀察海馬神經(jīng)元病理形態(tài)變化，采用生化方法檢測MTT值、LDH漏出率、SOD活性和MDA含量，分別用RT-PC

2、R和Western Blotting方法檢測5-LO mRNA和蛋白表達(dá)。
　　 （3）5-LO過表達(dá)腺病毒轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元，觀察5-LO過表達(dá)神經(jīng)元的變化，以及5-LO過表達(dá)對鋁鹽致海馬神經(jīng)元損傷的易感性。
　　 （4）用咖啡酸抑制5-LO活性，RNAi抑制5-LO表達(dá)，觀察其對鋁鹽致海馬神經(jīng)元損傷的作用。
　　 結(jié)果：
　　 （1）神經(jīng)元純度超過95％。鋁負(fù)荷致原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，神

3、經(jīng)元突起減少變短，活力降低，LDH漏出率明顯增加，SOD活性降低，MDA含量升高，5-LO mRNA和蛋白表達(dá)增加。
　　 （2）與空載腺病毒轉(zhuǎn)染組相比，單純5-LO過表達(dá)神經(jīng)元的數(shù)目、形態(tài)，細(xì)胞活力，LDH漏出率，SOD活性，MDA含量無明顯變化，5-LOmRNA和5-LO蛋白表達(dá)增加。與鋁鹽加空載腺病毒轉(zhuǎn)染組相比，5-LO過表達(dá)神經(jīng)元給予鋁鹽負(fù)荷，神經(jīng)元數(shù)目減少更為明顯，細(xì)胞碎片增加，細(xì)胞活力和SOD活性顯著降低，LDH漏出

4、率和MDA含量顯著增加，5-LO mRNA和5-LO蛋白表達(dá)也明顯增加。
　　 （3）咖啡酸給予能劑量依賴性地減輕鋁負(fù)荷/和5-LO腺病毒過表達(dá)海馬神經(jīng)元損傷，提高神經(jīng)元存活力，降低LDH漏出率，明顯阻遏鋁負(fù)荷神經(jīng)元SOD活性的降低和MDA含量的升高，能下調(diào)5-LO mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　 （4）5-LO RNA干擾能明顯減輕鋁負(fù)荷所致的海馬神經(jīng)元損傷，提高神經(jīng)元的存活力，降低LDH的漏出率，明顯阻遏鋁負(fù)荷神經(jīng)元S