乙型肝炎病毒前S1缺失突變對(duì)病毒生物學(xué)活性的影響研究.pdf

1、目的:分析乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)前S缺失突變?cè)诼砸倚透窝纵p中度、慢性乙型肝炎重度和慢加急性肝衰竭患者中的檢出率;分析前S1缺失突變病毒株體外復(fù)制力、HBsAg分泌、RNA水平、前S1抗原表達(dá)及其對(duì)表面抗原啟動(dòng)子Ⅱ（Surface antigen promoter Ⅱ，SPⅡ）轉(zhuǎn)錄活性的影響。
　　方法:研究對(duì)象為119例于2005年8月-2008年5月在解放軍第三○二醫(yī)院診療的住院患者，包括3

2、8例慢性乙型肝炎（以下簡(jiǎn)稱慢乙肝）輕中度、40例慢乙肝重度和41例慢加急性肝衰竭患者。從患者血清中提取HBVDNA，PCR擴(kuò)增獲得HBV全長(zhǎng)基因組序列，統(tǒng)計(jì)前S缺失突變的發(fā)生率。挑選有代表性的前S1缺失突變株及其相應(yīng)對(duì)照的野生型HBV全長(zhǎng)序列克隆至pGEM-Teasy載體中。用BspQⅠ/ScaⅠ雙酶切1.0倍HBV基因組，72小時(shí)后檢測(cè)體外病毒復(fù)制力及HBsAg表達(dá)水平，同樣的方法轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，72小時(shí)后提取HBVRNA，用相對(duì)

3、熒光定量法檢測(cè)RNA水平。構(gòu)建1.1倍pTriEX-HBV(C)表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，72小時(shí)后，酶聯(lián)免疫法測(cè)前S1抗原的表達(dá)。用PCR分別擴(kuò)增含有前S1缺失突變型和野生型的HBVSPⅡ啟動(dòng)子片段，構(gòu)建pGL3-SPⅡ雙熒光素酶真核報(bào)告表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染細(xì)胞48小時(shí)后檢測(cè)相對(duì)熒光素酶活性，分析前S1區(qū)缺失突變對(duì)重疊的SPⅡ啟動(dòng)子區(qū)熒光素酶活性表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:①HBV基因組前S缺失突變檢出率在慢乙肝輕中度、慢乙肝重度和慢

4、加急性肝衰竭三組中逐漸遞增，分別為5.3％、12.5％和24.4％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。②與未缺失野生株相比，前S1缺失突變病毒株的體外復(fù)制力和分泌的HBsAg水平分別降低了69％和23.7％;前S1缺失株的3.5kb前基因組RNA、2.4kbmRNA和2.1kbmRNA水平分別降低了87.67％、91.40％和85.94％。③與未缺失野生株相比，前S1區(qū)缺失導(dǎo)致前S1抗原表達(dá)消失。④與未缺失野生型相比，前S1缺失突變使重