人骨肉瘤細胞中點突變對NOV基因功能的影響敲低蛋白酶體亞基PSMA7抑制562細胞增殖.pdf

1、本論文第一部分工作是在人骨肉瘤細胞中研究點突變對NOV基因功能的影響。
　　 腎母細胞瘤過度表達基因(nephroblastoma over—expressed gene，NOV)是CCN家族的成員之一，與大多數(shù)CCN家族成員的結(jié)構(gòu)相似，可編碼細胞外基質(zhì)蛋白，參與調(diào)節(jié)細胞增殖、分化、粘附以及血管形成等復(fù)雜的病理和生理過程。目前尚未完全了解NOV基因的生物學特性和功能、分子機制和調(diào)節(jié)途徑，但大量的證據(jù)表明，NOV的異常與惡性腫瘤之

2、間有明顯的相關(guān)性。探討NOV抑制或促進腫瘤的機制及調(diào)節(jié)途徑，在腫瘤診斷及治療上有臨床應(yīng)用前景。
　　 我們發(fā)現(xiàn)了在人骨肉瘤細胞MG-63中存在NOV基因編碼區(qū)第125位核苷酸的點突變，并構(gòu)建了這一點突變NOV基因的pcDNA3.1真核細胞表達質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染到人骨肉瘤細胞Saos-2內(nèi)，對比轉(zhuǎn)染了pcDNA3.1-正常NOV基因組，點突變降低了NOV基因抑制細胞增殖和促進細胞遷移的能力。進一步的免疫熒光染色和Westernblot顯示

3、NOV基因的這一點突變使NOV蛋白的分泌性降低，從而使NOV基因的生物學作用發(fā)生改變。目前尚未見有對NOV基因點突變的報道。我們對NOV基因點突變的研究為揭示NOV基因的生物學功能及作用機制，以及NOV在腫瘤細胞中的作用提供了新的線索。
　　 本文第二部分工作是用siRNA靶向干擾蛋白酶體亞基PSMA7的表達抑制K562細胞增殖的研究。
　　 人蛋白酶體亞基7(PSMA7)是20S蛋白酶體核心顆粒的一個α亞基，參與組成細

4、胞內(nèi)蛋白質(zhì)最主要的選擇性降解途徑泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin-proteasomesystem，UPS)，其編碼基因定位于20q13.33染色體。PSMA7在腫瘤細胞中廣泛表達，一些研究表明PSMA7參與了多種重要的腫瘤相關(guān)蛋白的表達及活性調(diào)節(jié)。目前對PSMA7功能的報道并不完全一致，提示PSMA7在不同細胞中可能有不同的作用，其功能可能有細胞或組織特異性。目前對PSMA7在白血病中的作用尚無報道。
　　 我們利用RN

5、A干擾技術(shù)，化學合成針對PSMA7序列的siRNA，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染人髓性白血病K562細胞使其PSMA7表達水平降低，發(fā)現(xiàn)K562細胞增殖能力明顯降低但未發(fā)生明顯的凋亡，S期細胞數(shù)減少，Cyclin E蛋白水平降低，提示PSMA7通過影響細胞周期蛋白水平而抑制K562細胞的增殖。這些結(jié)果為明確PSMA7的作用機制及其在白血病中的意義提供了有益的資料。
　　 綜上所述，本文第一部分發(fā)現(xiàn)在人骨肉瘤MG-63細胞中NOV基因編碼區(qū)第125