多重聚合酶鏈反應對真菌性角膜炎快速診斷及菌屬鑒定的探索.pdf

1、鄭州大學碩士學位論文多重聚合酶鏈反應對真菌性角膜炎快速診斷及菌屬鑒定的探索姓名：楊子建申請學位級別：碩士專業(yè)：眼科學指導教師：王麗婭20060520鄭州大學2006屆碩士研究生論文多重PcR對真菌性角膜炎快速診斷及菌屬鑒定的探索(摘要)體系的可靠性。結果：經過多重PcR體系擴增后，瓊脂糖凝膠電泳結果鐮孢菌屬、曲霉菌屬、牽連青霉菌和新月彎孢菌擴增出了長度分別為360bp、430bp、245bp和300bp的條帶。人基因組DNA及其他眼部常

2、見的致病微生物DNA則未擴增出條帶。表明本體系具有高度的特異性。PCR靈敏度研究中，鐮孢菌、曲霉菌、青霉菌、彎孢菌質粒DNA1ng一10fg的6個質量濃度的模板加入反應體系中進行擴增，擴增產物在瓊脂糖凝膠電泳下觀察，結果顯示10喀的DNA濃度擴增出了目的條帶而1fg的DNA濃度為陰性因此，該多重PCR體系的靈敏度為10fg。42例臨床培養(yǎng)真菌用多重PCR體系鑒定，其中包括鐮孢菌28例，曲霉菌11例，青霉菌2例，彎孢菌1例。鑒定結果鐮孢菌

3、，曲霉菌及彎孢菌和培養(yǎng)結果一致，2株青霉菌中1例鑒定結果與培養(yǎng)結果一致而1例未能擴增出目的條帶。結果表明本多重PcR體系具有高度的特異性。臨床標本檢測：86例臨床角膜刮片標本，分別用KOH涂片法、多重PCR體系和真菌培養(yǎng)法鑒定。KoH涂片法檢測陽性46例，陽性率為535％；多重PCR法檢測陽性60例，陽性率為698％；真菌培養(yǎng)法陽性59例，陽性率為686％。經x2檢驗，真菌培養(yǎng)法及多重PcR法的陽性率與KOH涂片法陽性率的差別有統計學意