同一個(gè)體食管癌變過(guò)程中p16甲基化、缺失和蛋白表達(dá)變化及其對(duì)細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、研究背景: 食管癌是世界上最常見(jiàn)的六大惡性腫瘤之一，具有顯著的地域性分布差異，河南省林州市及其毗鄰的輝縣、安陽(yáng)等地區(qū)是我國(guó)，也是世界上食管癌發(fā)病率和死亡率最高的地區(qū)之一。5年生存率僅為lO％左右，預(yù)后極差。然而，如在早期階段得到及時(shí)的治療，其五年生存率可達(dá)到90％以上。因此，食管癌早期發(fā)現(xiàn)是臨床治療上提高治愈率的瓶頸因素之一。 實(shí)驗(yàn)室最近的研究提示：食管癌變演進(jìn)是多種基因變化先后累積或疊加綜合作用的結(jié)果。腫瘤抑制基因p5

2、3.Rb系統(tǒng)變化是河南食管癌高發(fā)區(qū)人群食管癌變過(guò)程中發(fā)生頻率最高的分子生物學(xué)改變；p53.Rb系統(tǒng)變化可能是河南食管癌高發(fā)區(qū)人群食管癌變最重要的分子機(jī)制。食管癌組織p16蛋白表達(dá)、缺失及甲基化可能是食管癌變最重要的分子基礎(chǔ)之一。 腫瘤抑制基因p16編碼的p16蛋白可結(jié)合CDK4或CyclinD-CDK4復(fù)合物，阻止RB蛋白磷酸化，在細(xì)胞周期Gl/S限制點(diǎn)起關(guān)鍵負(fù)調(diào)控作用，目前認(rèn)為其失活機(jī)制主要有：缺失、點(diǎn)突變及啟動(dòng)子區(qū)DNA的5

3、℃pG島甲基化。近年研究表明人類多種腫瘤中存在著較普遍的p16基因表達(dá)失活現(xiàn)象。甲基化是真核生物DNA的一種最常見(jiàn)的修飾方式，也是一種重要的表遺傳(Epigenetic，基因型不變，而表現(xiàn)型改變)機(jī)制。5一脫氧雜氮胞苷(5-aza-CdR)是研究最多的去甲基化藥物，它與胞嘧啶結(jié)構(gòu)相似，可與DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT1)共價(jià)結(jié)合使酶失活；也可整合入DNA中，從而達(dá)到去甲基化的目的。 很顯然，進(jìn)一步了解河南食管癌高發(fā)區(qū)癌及癌前病變

4、p16基因甲基化和蛋白表達(dá)變化特征及其與這些早期癌變的關(guān)系，將有助于篩選和建立用于高危人群檢測(cè)和早期診斷的生物學(xué)指標(biāo)和方法。 本研究通過(guò)分析河南食管癌高發(fā)區(qū)居民同一個(gè)體食管癌和癌前病變組織p16基因甲基化及蛋白表達(dá)變化特征和規(guī)律，并進(jìn)一步觀察去甲基化藥物5．Aza．CdR對(duì)p16基因甲基化食管癌細(xì)胞系細(xì)胞增殖變化的影響，進(jìn)一步闡明食管癌階段漸進(jìn)的分子機(jī)制，并為建立高危人群篩查和早期診斷的生物指標(biāo)，以及生物防治新思路提供重要理論依

5、據(jù)。 研究結(jié)果： 1.同一個(gè)體食管癌、癌旁不典型增生及正常組織p16蛋白的表達(dá) 食管癌組織p16蛋白表達(dá)減弱和缺失最明顯(41/45，91％)；不典型增生組織次之(38/45，84％)；但是，在正常的食管上皮組織中p16蛋白均為正常表達(dá)(45/45，l00％)。三者間差異顯著(x2=95．64，P=0．00)。此外，p16蛋白表達(dá)減弱和缺失與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間有顯著性差異(x2=4.03，P=0．045)，然而，腫瘤

6、不同的分化程度和不同的浸潤(rùn)深度與p16蛋白表達(dá)間無(wú)顯著性差異(x2=4.72，P=0．095；x2=0．52，P=0．47)。 2.同一個(gè)體食管癌、癌旁不典型增生及正常組織p16基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化情況 食管癌(33/45，73％)和癌旁不典型增生組織(32/45，71％)甲基化增高明顯，均為純合型。但是，癌旁正常組織p16基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化檢出率33％(15/45)，均為雜合型。三者間差異顯著(x2=18．84，P=0.

7、00)。此外，p16基因甲基化狀態(tài)與分化程度有顯著性差異(x2=7.77，P=0.02)；然而，與不同的浸潤(rùn)深度和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)顯著性差異(x2=1.49，P=0.22；x2=1.02，P=0.31)。 3.同一個(gè)體食管癌、癌旁不典型增生及正常組織p16基因純合缺失情況 食管癌組織純合性缺失最明顯(4/455，9％)，但是，癌旁不典型增生和正常組織均未見(jiàn)純合缺失。三者間差異顯著(x2=122.22，P=0.00)。此外

8、，p16基因純合缺失與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)深度間有顯著性差異(x2=8.45，P=0.00；x2=6.65，P=0.01)；然而，腫瘤不同的分化程度與p16基因純合缺失無(wú)顯著性差異(x2=3.52，P=0.17)。 4.同一個(gè)體食管癌、癌旁不典型增生及正常組織p16基因雜合缺失情況 5.5-aza-CdR對(duì)ECl8、Ecl、ECl09、Tel、TElO細(xì)胞系中p16基因缺失、甲基化、mRNA表達(dá)、蛋白表達(dá)及細(xì)胞體外增殖能力的