白血病耐藥相關(guān)膜蛋白SFPQ的發(fā)現(xiàn)及其耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、目前化學(xué)治療仍是臨床治療白血病的主要手段，也是造血干細(xì)胞移植的基礎(chǔ)。近年來盡管有多種新的藥物和治療方案推出，但大多數(shù)急性白血病患者最終因治療失敗而死亡。腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物產(chǎn)生抗藥性是化療失敗的一個(gè)主要原因。導(dǎo)致治療失敗的原因是多方面的，其中多藥耐藥性（multi-drug resistance，MDR）是最重要的一種。MDR又稱多藥抗藥性（pleiotropic durg resistnace），是指惡性腫瘤細(xì)胞對(duì)一種化療藥物產(chǎn)生耐藥現(xiàn)

2、象后，產(chǎn)生了對(duì)多種結(jié)構(gòu)不同、作用靶點(diǎn)和作用機(jī)制各異的其他抗癌藥物的抗藥性。
　　 白血病耐藥的產(chǎn)生是多因素的，隨誘導(dǎo)藥物、細(xì)胞種類、分化階段、及細(xì)胞所處微環(huán)境的不同而表現(xiàn)出不同的耐藥表型。雖然已有的研究揭示了一些腫瘤多藥耐藥的機(jī)制，但目前仍然不能完全解釋腫瘤多藥耐藥現(xiàn)象并有效逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥。目前在白血病耐藥的臨床治療方面主要以抑制P-糖蛋白功能的耐藥逆轉(zhuǎn)劑為主，但其臨床效果也不理想，至今無一獲得FDA批準(zhǔn)上市。雖然急性白

3、血病耐藥的發(fā)生機(jī)制已經(jīng)被廣泛的研究，但耐藥機(jī)制仍不明了，與白血病耐藥相關(guān)的細(xì)胞膜新靶點(diǎn)的篩選方法仍未得以建立。
　　 事實(shí)上白血病患者耐藥產(chǎn)生并非單一機(jī)制，此外，臨床上患者間的個(gè)體差異也為治療帶來了困難?？梢姲l(fā)現(xiàn)更多的白血病耐藥相關(guān)的治療靶點(diǎn)以實(shí)現(xiàn)多靶點(diǎn)聯(lián)合檢測(cè)與治療、豐富白血病耐藥機(jī)理從多角度全面闡明白血病耐藥機(jī)制以綜合制定白血病耐藥治療方案，建立治療和預(yù)后指標(biāo)是解決上述問題的對(duì)策。細(xì)胞膜蛋白暴露于細(xì)胞外表面，特別容易被抗體等

4、試劑識(shí)別，作為靶點(diǎn)特異的檢測(cè)、診斷和治療的標(biāo)志物；此外細(xì)胞膜蛋白還特別適于作為較為分散的血液腫瘤的治療靶點(diǎn)。鑒于此，本文著力于尋找新的白血病耐藥相關(guān)的細(xì)胞膜蛋白，考察其與白血病耐藥的相關(guān)性并探討其可能的機(jī)制。
　　 為尋找白血病耐藥相關(guān)的細(xì)胞膜靶點(diǎn)，本研究首先應(yīng)用消減免疫法，以人早幼粒細(xì)胞HL60活細(xì)胞作為耐受原誘導(dǎo)Balb/c小鼠免疫耐受，然后以阿霉素耐藥株HL60/ADR細(xì)胞作為免疫原免疫小鼠，得到能特異識(shí)別差異表達(dá)的耐藥株

5、與敏感株HL60細(xì)胞膜表面蛋白的雜交瘤細(xì)胞庫(kù)。通過對(duì)HL60和HL60/ADR兩種靶細(xì)胞的選擇性篩選和亞克隆培養(yǎng)、抗體的制備與純化等過程，我們最終獲得五株與兩種靶細(xì)胞結(jié)合能力不同的單克隆抗體，這些抗體攜帶特定的耐藥蛋白的標(biāo)志信息。
　　 為了進(jìn)一步獲得相應(yīng)抗原的信息，我們通過免疫沉淀和蛋白電泳技術(shù)分離敏感和耐藥的HL60差異表達(dá)的細(xì)胞膜蛋白，并通過MALDI-TOF-MS鑒定抗原。最終我們獲知單抗5D12的靶抗原為SFPQ，該蛋

6、白高表達(dá)于敏感的HL60細(xì)胞膜表面，在阿霉素耐藥株細(xì)胞膜其表達(dá)降低。通過siRNA干擾SFPQ，我們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞膜高表達(dá)該蛋白的HL60細(xì)胞其膜SFPQ表達(dá)水平降低，由此確認(rèn)SFPO確為單抗5D12的靶抗原。此結(jié)果系首次發(fā)現(xiàn)SFPQ可表達(dá)在腫瘤細(xì)胞膜表面。
　　 通過實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)5D12為有生物學(xué)活性的細(xì)胞膜蛋白SFPQ的特異性抗體。在以5D12作為研究SFPQ的功能的實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞膜SFPQ可增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)阿霉素的敏感性。進(jìn)一步

7、的研究顯示，細(xì)胞膜SFPQ可能通過抑制細(xì)胞增殖和克隆形成能力而減緩細(xì)胞生長(zhǎng)，從而維持HL60細(xì)胞對(duì)阿霉素的敏感性。在對(duì)影響細(xì)胞增殖能力可能機(jī)制的研究中我們發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞膜SFPQ通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和減少細(xì)胞S期比例減少DNA復(fù)制而抑制細(xì)胞增殖。該結(jié)果系首次報(bào)道HL60細(xì)胞膜表面蛋白SFPQ為一耐藥相關(guān)蛋白。
　　 綜上結(jié)果，我們認(rèn)為細(xì)胞膜SFPQ可作為人早幼粒細(xì)胞白血病阿霉素耐藥的新的細(xì)胞膜靶點(diǎn)，并且該靶點(diǎn)有可能成為檢測(cè)和診斷該類白血