MTX對(duì)映體誘導(dǎo)白血病細(xì)BALL-1、CCRF-CEM耐藥及其耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、目的：建立耐氨甲蝶呤（MTX）對(duì)映體的人白血病BALL-1和CCRF-CEM細(xì)胞株，觀察其生物學(xué)特性。分析MTX不同對(duì)映體耐藥細(xì)胞株表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)。
　　方法：濃度遞增結(jié)合低劑量持續(xù)誘導(dǎo)的方法建立 MTX不同對(duì)映體耐藥細(xì)胞株，顯微鏡觀察不同MTX對(duì)映體作用BALL-1和CCRF-CEM細(xì)胞株后細(xì)胞形態(tài)變化及活性差異，MTT法檢測(cè)耐藥細(xì)胞株和親本細(xì)胞株耐藥指數(shù)，細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，Tran

2、swell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)D-(-)-MTX耐藥細(xì)胞株與L-(+)-MTX耐藥細(xì)胞株遷移能力差異，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。RT-PCR法檢測(cè)各細(xì)胞株EGFR、KRas、TGF、PI3K基因mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.采用濃度遞增結(jié)合低劑量持續(xù)誘導(dǎo)的方法，成功建立MTX不同對(duì)映體對(duì)BALL-1、CCRF-CEM細(xì)胞的耐藥細(xì)胞株；MTT檢測(cè)結(jié)果表明：L-(+)-MTX/BALL-1，CCRF-CEM對(duì)L-(+)-MTX的耐藥指數(shù)分別為

3、2.89，3.73。D-(-)-MTX/BALL-1，CCRF-CEM對(duì)D-(-)-MTX的耐藥指數(shù)分別為9.65，10.72。2.熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)L-(+)-MTX作用后的BALL-1和CCRF-CEM凋亡數(shù)和非凋亡死亡數(shù)明顯高于D-(-)-MTX，而活細(xì)胞數(shù)低于D-(-)-MTX。3. Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示D-(-)-MTX耐藥細(xì)胞株遷移能力強(qiáng)于L-(+)-MTX耐藥細(xì)胞株。4.細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示：與親

4、本細(xì)胞BALL-1，CCRF-CEM相比L型和D型耐MTX細(xì)胞株的增殖速度減慢（P<0.05），S期細(xì)胞數(shù)量減少(P<0.05)，G0/G1期細(xì)胞增多(P<0.05)。5. BALL-1細(xì)胞組(BALL-1，L型，D型耐MTX細(xì)胞株)有EGFR mRNA基因表達(dá)，目的基因與內(nèi)參基因的光密度比值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=641.41，P=0.000），L型與D型耐MTX細(xì)胞株光密度值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）；BALL-1細(xì)胞組有KR

5、as mRNA基因表達(dá)（F=673.086， P=0.000），L型與D型耐MTX細(xì)胞株光密度值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004）。CCRF-CEM細(xì)胞組（CCRF-CEM，L型，D型耐MTX細(xì)胞株）亦有EGFR和K-Ras mRNA基因表達(dá)（F=151.323，P=0.000），（F=330.894，P=0.000），其中L型與D型耐MTX細(xì)胞株光密度值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（EGFRmRNA P=0.000， K-RasmRNA P=0.