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文檔簡介
1、目的:前B細胞集落增強因子(pre-Bcellcolonyenhancingfactor,PBEF)是聯(lián)系炎癥與胰島素抵抗的橋梁,是研究和治療炎癥所致胰島素抵抗的潛在靶點。然而PBEF與胰島素通路是否存在相互作用及其機制一直存在很大爭議。脂筏作為膜信號轉導的重要平臺,在胰島素信號通路中發(fā)揮著重要作用。本研究首次從一個全新的角度——脂筏來探究PBEF與胰島素受體(insulinreceptor,IR)及胰島素信號通路相互作用的機制,以期揭
2、示炎癥所致的胰島素抵抗的新機制。
方法:采用去垢劑及非去垢劑法從A549細胞系中提取脂筏,鑒定PBEF與IRβ在脂筏內(nèi)外的分布。構建重組PBEF質粒及其突變質粒S199,提取PBEF及S199蛋白,研究PBEF對IRβ在脂筏內(nèi)外分布的影響。運用免疫共沉淀(immunoprecipitation,IP)研究PBEF、IRβ與Caveolin-1(Cav-1)的相互作用,及其與Cav-1磷酸化的關系。采用不同時間點研究PBEF對胰
3、島素誘導的Akt活化的影響。
結果:PBEF在脂筏內(nèi)外均有分布,而IRβ在非去垢劑法中僅存在于脂筏。PBEF能誘導IRβ從脂筏轉移至非脂筏,NAD也具有類似作用,但該作用不能完全被S199和FK866阻斷。IRβ、PBEF與Cav-1三者相互結合。PBEF可導致非脂筏中與IRβ結合的Cav-1磷酸化水平明顯增加。給予胰島素處理5min內(nèi)加入PBEF,Akt的磷酸化水平較胰島素單獨作用時降低;而給予胰島素處理5min后再加入PB
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