守宮硫酸糖肽通過(guò)bFGF抑制腫瘤淋巴管生成的體外研究.pdf

1、目的:
　　腫瘤淋巴管生成是腫瘤局部淋巴結(jié)浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的必要條件，抑制腫瘤淋巴管生成從而抑制腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移已成為惡性腫瘤治療的新靶點(diǎn)。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）是一種肝素依賴(lài)性的生長(zhǎng)因子，它是重要的促淋巴管生成因子。守宮硫酸糖肽是傳統(tǒng)中藥守宮抗腫瘤的主要成份，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與肝素相類(lèi)似，我們之前的研究表明守宮硫酸糖肽是bFGF的靶向抑制劑。本課題通過(guò)守宮硫酸糖肽對(duì)

2、腫瘤淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的體外研究，探究守宮硫酸糖肽對(duì)腫瘤淋巴管生成的影響及其作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.取人腫瘤淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞(hLECs)，設(shè)守宮硫酸糖肽高劑量組、守宮硫酸糖肽低劑量組、守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組、bFGF組、陰性對(duì)照組。通過(guò)MTS法檢測(cè)守宮硫酸糖肽對(duì)人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響，并繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn)。
　　2.分組同前。通過(guò)Wound healing和Transw

3、ell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)守宮硫酸糖肽對(duì)人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞遷移的影響。
　　3.分組同前。倒置顯微鏡下觀(guān)察守宮硫酸糖肽對(duì)人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞形成淋巴管樣結(jié)構(gòu)的影響。
　　4.分組同前。通過(guò)Western-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)藥物作用后hLECs內(nèi)Erk、p-Erk表達(dá)的情況。
　　結(jié)果:
　　1.MTS法計(jì)數(shù)細(xì)胞探究hLECs增殖情況:守宮硫酸糖肽高劑量組及守宮硫酸糖肽低劑量組增殖的細(xì)胞數(shù)較空白對(duì)照組未見(jiàn)明顯差異(P＞0.05)，bF

4、GF組增殖的細(xì)胞數(shù)較空白對(duì)照組明顯增多（P＜0.05）。而守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組增殖的細(xì)胞數(shù)較bFGF單用組明顯減少(P＜0.05)，其中以守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組增殖的細(xì)胞數(shù)較bFGF單用組減少的更加明顯。
　　2.(1) Wound healing實(shí)驗(yàn):從圖片細(xì)胞遷移的距離來(lái)看，守宮硫酸糖肽高劑量組及守宮硫酸糖肽低劑量組細(xì)胞遷移的距離較空白對(duì)照組未見(jiàn)明顯差異(P＞0.0

5、5)，bFGF組較空白對(duì)照組有促進(jìn)細(xì)胞遷移的作用(P＜0.05）。而守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組細(xì)胞遷移的距離較bFGF單用組明顯減小（P＜0.05），其中以守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組細(xì)胞遷移的距離較bFGF單用組減小的更加明顯。
　　(2) Transwell實(shí)驗(yàn):從穿過(guò)Transwell小室膜的細(xì)胞數(shù)來(lái)看，守宮硫酸糖肽高劑量組及守宮硫酸糖肽低劑量組較空白對(duì)照組未見(jiàn)明顯差異(P＞

6、0.05)，bFGF組較空白對(duì)照組明顯增多(P＜0.05）。而守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組較bFGF單用組明顯減少(P＜0.05），其中以守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組較bFGF單用組細(xì)胞數(shù)減少的更加明顯。
　　3.倒置顯微鏡下觀(guān)察hLECs形成淋巴管樣結(jié)構(gòu)的情況:從hLECs在基質(zhì)膠上形成的封閉的不規(guī)則多邊形的數(shù)目來(lái)看，守宮硫酸糖肽高劑量組及守宮硫酸糖肽低劑量組較空白對(duì)照組未見(jiàn)明顯差

7、異(P＞0.05），bFGF組較空白對(duì)照組明顯增多(P＜0.05）。而守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組較bFGF單用組明顯減少(P＜0.05），其中以守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組較bFGF單用組封閉的不規(guī)則多邊形數(shù)目減少的更加明顯。
　　4.Western-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)hLECs內(nèi)Erk、p-Erk表達(dá):守宮硫酸糖肽高劑量組、守宮硫酸糖肽低劑量組、守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、

8、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組、bFGF組hLECs內(nèi)Erk的表達(dá)較空白對(duì)照組均未見(jiàn)明顯差異。守宮硫酸糖肽高劑量組及守宮硫酸糖肽低劑量組hLECs內(nèi)p-Erk的表達(dá)較空白對(duì)照組未見(jiàn)明顯差異，bFGF組hLECs內(nèi)p-Erk的表達(dá)較空白對(duì)照組明顯增多。而守宮硫酸糖肽高劑量與bFGF合用組、守宮硫酸糖肽低劑量與bFGF合用組hLECs內(nèi)p-Erk的表達(dá)較bFGF單用組明顯減少。
　　結(jié)論:
　　1.守宮硫酸糖肽本身對(duì)hLEC

9、s的增殖沒(méi)有影響，但是守宮硫酸糖肽能抑制bFGF誘導(dǎo)的hLECs的增殖。
　　2.守宮硫酸糖肽本身對(duì)hLECs的遷移沒(méi)有影響，但是守宮硫酸糖肽能抑制bFGF誘導(dǎo)的hLECs的遷移。
　　3.守宮硫酸糖肽本身對(duì)hLECs淋巴管樣結(jié)構(gòu)的形成沒(méi)有影響，但是守宮硫酸糖肽能減弱bFGF誘導(dǎo)的hLECs淋巴管樣結(jié)構(gòu)的形成。
　　4.守宮硫酸糖肽對(duì)bFGF誘導(dǎo)的hLECs增殖、遷移、淋巴管樣結(jié)構(gòu)形成的抑制作用部分是通過(guò)下調(diào)hLECs