角膜內(nèi)皮移植及其排斥反應(yīng)的研究.pdf

1、目的：①研究在角膜內(nèi)皮移植(EK)手術(shù)中保留后彈力層是否會影響供體植片的貼敷。②評價不同方法獲取Descemet膜-角膜內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)合體(DM+CECs)的效果。③利用后彈力層撕除術(shù)建立一種新的角膜內(nèi)皮失代償模型。④通過高危兔眼模型分析角膜內(nèi)皮移植術(shù)后效果及免疫排斥反應(yīng)特點(diǎn)。 方法：⑴根據(jù)手術(shù)方法的不同將30只兔分成3組：去除后彈力層組(DSEK組)、不去除后彈力層組(nDSEK組)和供體組，每組10只，右眼為手術(shù)眼。術(shù)后用裂隙燈

2、觀察角膜的透明情況，用UBM測量角膜厚度。術(shù)后8周獲取角膜瓣進(jìn)行組織病理觀察。⑵將20兔(40只眼)根據(jù)手術(shù)方法的不同隨機(jī)分成4組：鑷子剝離、水分離、大氣泡法和機(jī)械分離組(采用人工前房)，每組10眼。通過活體染色和組織切片分析評價DM+CECs。⑶根據(jù)手術(shù)方法的不同將30只兔分成三組：角膜內(nèi)皮刮除組，后彈力層撕除組，DSEK組，每組10只，右眼為手術(shù)眼。每組定期通過角膜內(nèi)皮活體染色，眼前節(jié)照相和UBM至少觀察2月。⑷根據(jù)手術(shù)方法的不同將

3、42只兔分成三組：對照組(未移植組)，穿透性移植(PK)組和DSEK組，每組14只，右眼為手術(shù)眼。術(shù)后用裂隙燈檢查角膜混濁、水腫和新生血管情況，并記錄排斥指數(shù)(RI)和新生血管指數(shù)(NI)。用UBM定期測量角膜厚度。采用定量PCR技術(shù)測定術(shù)后20天各組IL-2、IL-10和VEGF基因的表達(dá)。 結(jié)果：①nDSEK組術(shù)后1天有l(wèi)眼植片移位，此后，兩組均未發(fā)現(xiàn)植片移位或脫落。組織病理顯示，DSEK組術(shù)后8周未見供體植片和受體植床存在

4、明顯的分界面，纖維組織排列規(guī)整，未見瘢痕。nDSEK組術(shù)后8周仍可見后彈力層存在，但植片與植床緊密貼敷，未見明顯間隙。②鑷子剝離組獲取DM+CECs2眼成功，水分離組8眼，大氣泡法5眼和機(jī)械分離法3眼，四組之間的成功率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。水分離法(98.03±2.18％)和大氣泡法(97.14±3.04％)內(nèi)皮細(xì)胞存活率(ESR)明顯高于鑷子剝離法(80.16±5.21％)和機(jī)械分離法(71.56±9.57％)(F=436

5、.04，P<0.05)。蘇木精-伊紅染色顯示水分離法和大氣泡法對內(nèi)皮細(xì)胞損傷小。③后彈力層撕除組角膜始終保持混濁，角膜內(nèi)皮刮除組和DSEK組角膜逐漸透明，角膜厚度逐漸減低?；铙w染色顯示角膜后彈力層撕除組術(shù)后2月仍無角膜內(nèi)皮生長。④PK組和DSEK組植片存活時間分別為(28.1±8.6)天和(42.9±20.2)天，(X2=8.483 p=0.004，p<0.05)。眼前節(jié)檢查顯示PK組大部分兔眼角膜水腫、混濁及大量新生血管，而DSEK組

6、只有少量兔眼出現(xiàn)角膜混濁水腫。病理組織切片顯著PK組單核細(xì)胞浸潤明細(xì)高于DSEK組。RT-PCR結(jié)果顯示PK組IL-2、IL-10和VEGF mRNA的表達(dá)均明顯高于DSEK組。 結(jié)論：⑴供體植片與保留后彈力層的植床緊密貼敷說明角膜內(nèi)皮移植術(shù)并非必須去除后彈力層。⑵水分離法或大氣泡法是安全、有效的獲取DM+CECs技術(shù)。⑶后彈力層撕除術(shù)建立的角膜內(nèi)皮失代償模型可有效的用來研究角膜內(nèi)皮移植研究。⑷EK術(shù)后出現(xiàn)免疫排斥反應(yīng)幾率低，且