黑睛排斥湯防治角膜移植免疫排斥反應的基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的:探討黒睛排斥湯在高危角膜移植免疫排斥反應中的作用及其機制。
　　方法:1、觀察灌服黑睛排斥湯對大鼠同種異體角膜移植免疫排斥反應的影響;并與灌服CsA組、黑睛排斥湯+CsA聯(lián)合組比較,觀察其效果,為臨床防治角膜移植排斥反應提供有效用藥方案?？p線法誘導角膜新生血管,以Wistar大鼠為受體,SD大鼠為供體建立同種異體高危角膜移植動物模型,隨機分組(A~D共4組)。其中A組為對照組;B組為灌服CsA( l0mg/Kg/d)組,C組

2、為灌服黒睛排斥湯4g/Kg/d組,D組為灌服黒睛排斥湯4g/Kg/d+ CsA( l0mg/Kg/d)組,用裂隙燈顯微鏡觀察記錄角膜植片透明度、水腫度、新生血管度、移植排斥指數(shù)(RI)及角膜植片存活時間,得出結(jié)果做統(tǒng)計學處理。術(shù)后第15天每組隨機處死4只大鼠做角膜病理檢查,用光學顯微鏡和顯微照相儀分析系統(tǒng)觀察計數(shù)各組角膜植片中炎性細胞浸潤情況,細胞數(shù)值做統(tǒng)計分析。術(shù)后第30天做肝臟和腎臟病理檢查,評價藥物毒性。
　　2、黑睛排斥湯

3、抑制高危角膜移植免疫排斥作用的機理研究縫線法誘導角膜新生血管,以Wistar大鼠為受體,SD大鼠為供體建立同種異體高危角膜移植動物模型,分為(A~C組),其中A為模型對照組;B為灌服黒睛排斥湯4g/Kg/d組;C為灌服黒睛排斥湯4 g/Kg/d+ CsA( l0mg/Kg/d)組。角膜移植術(shù)后第7、14、21天大鼠斷尾取血,用流式細胞分析儀檢測外周血中的CD4+、CD8+淋巴細胞的百分比及CD4+/CD8+的比值,做統(tǒng)計學處理。各組于術(shù)

4、后25天無菌取脾,制備脾淋巴細胞懸液,行大鼠脾淋巴細胞增殖反應檢測,做統(tǒng)計學處理。
　　結(jié)果:1、觀察灌服黑睛排斥湯對大鼠同種異體角膜移植免疫排斥反應的影響。(1)從對新生血管的抑制來看,灌服中藥組和聯(lián)合用藥組均能有效抑制新生血管,從總的抑制角膜移植排斥反應的效應看,口服中藥組可有效的防治角膜移植排斥反應,聯(lián)合用藥組效果要優(yōu)于單一用藥組,從角膜植片的存活時間以及生存曲線可看出:對照組角膜移植片存活時間最短,平均10.38±1.69

5、天,灌服黒睛排斥湯4mg/Kg/d+ Cs A( l0mg/Kg/d)組最長,平均22.5±3.07天。(2)病理檢查:HE染色,對照A組角膜可見植片水腫,新生血管長入。角膜基質(zhì)中有大量的炎性細胞浸潤,B、C組可見角膜植片基質(zhì)中有少量的炎性細胞侵潤及新生血管形成。D組幾乎沒有炎性細胞侵潤和新生血管。肝臟和腎臟的病理檢查未見明顯異常。(3)病理細胞計數(shù)中性粒細胞和淋巴細胞各用藥組細胞數(shù)下降與A對照組比較有明顯差異。
　　2、黑睛排斥

6、湯抑制高危角膜移植免疫排斥作用的機理研究(1)外周血淋巴細胞對比結(jié)果如下:術(shù)后7天,C組CD4+, CD4+/CD8+與A組比較明顯降低(P＜0.05);術(shù)后14天,B、C組CD4+較A組明顯下降(P＜0.05);術(shù)后21天,B、C組CD4+、CD4+/CD8+與A組比較明顯降低(P＜0.01),但各組CD8+比較無明顯差異。(2)脾淋巴細胞增殖反應結(jié)果如下:B、C組較A組T淋巴細胞增殖反應明顯受抑制(P＜0.01),其中以C組更為明顯