阿奇霉素在結(jié)核性胸膜炎中的免疫糾偏作用研究.pdf

1、目的：研究阿奇霉素對(duì)結(jié)核性胸腔積液中淋巴細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子（IFN—γ、TGF—α、IL—4、IL—12）功能的影響，探討阿奇霉素在結(jié)核病中可能的免疫糾偏作用。 方法：以診斷明確的結(jié)核性胸膜炎患者為研究對(duì)象；無(wú)菌術(shù)收集胸腔積液，上清液凍存?zhèn)溆?，以人淋巴?xì)胞分離液及貼壁培養(yǎng)方法分離其中細(xì)胞；CD4單克隆抗體孵育提純細(xì)胞后經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)染色驗(yàn)證所得細(xì)胞類(lèi)型；并將分離細(xì)胞以0．1%臺(tái)盼藍(lán)染色活細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)細(xì)胞濃度為1×106/ml，設(shè)陰

2、性對(duì)照組（不施加藥物干預(yù)）、陽(yáng)性對(duì)照組（給予不同濃度多抗甲素干預(yù)）、試驗(yàn)組（以不同濃度阿奇霉素干預(yù)），接種于12孔板（含10%胎牛血清、100mg/L植物血凝素的完整RPMI1640培養(yǎng)基），其中，陰性對(duì)照組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，陽(yáng)性對(duì)照組和試驗(yàn)組分別按同一濃度組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，置37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)；各培養(yǎng)孔內(nèi)均不更換培養(yǎng)基，分別于12、24、48、72小時(shí)離心，取培養(yǎng)液及細(xì)胞沉渣備用；抽提總RNA，用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（revers

3、e transcription—polymerase chain reaction，RT—PCR）觀察不同干預(yù)下各階段γ—干擾素（interferon—gamma，IFN—γ）、細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（transforming growth factor—beta，TGF—β）、白細(xì)胞介素—4（interleukin—4，IL—4）、白細(xì)胞介素—12（interleukin—12，IL—12）mRNA表達(dá)水平；同步用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzy

4、me linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)不同階段各組上清液及培養(yǎng)液內(nèi)IFN—γ、TGF—β、IL—4、IL—12濃度。 結(jié)果：以CD4單克隆抗體孵育結(jié)核性胸腔積液中分離細(xì)胞經(jīng)免疫化學(xué)染色，明顯呈棕色反應(yīng)，提示CD4+T淋巴細(xì)胞陽(yáng)性率為74．73%。目的基因擴(kuò)增電泳條帶灰度掃描結(jié)果顯示，試驗(yàn)組IFN—γ、IL—12 mRNA表達(dá)上調(diào)，TGF—β、IL—4mRNA表達(dá)下調(diào)，與陰性對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、差異（P<0．05），與陽(yáng)性對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05）。ELISA檢測(cè)結(jié)果與RT—PCR分析結(jié)果基本一致，呈同向變化，即試驗(yàn)組IFN—γ、IL—12濃度增加，TGF—β、IL—4濃度減少，與陰性對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0．05），與陽(yáng)性對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05）。并且，前述結(jié)果呈現(xiàn)一定時(shí)間以及劑量依賴性，即隨阿奇霉素濃度增加、作用時(shí)間延長(zhǎng)，IFN—γ、IL—12表達(dá)上調(diào)，及TGF—β、IL—4表達(dá)下調(diào)逐漸顯著；以